Toxicity of the ethidium bromide applied inte molecular biological studies

Abstract

Tato diplomová práce je zaměřena na zhodnocení toxicity a mutagenity etidium bromidu. Na základě chemických, fyzikálních a biologických vlastností etidium bromidu jsou sledovány jeho účinky na živé organismy. Provedli jsme orientační test toxicity etidium bromidu na biologickém modelu prvoka Paramecium caudatum. Za použití preparátů barvených fluorescenčně jsme hodnotili vliv etidium bromidu na buněčnou linii P3HR1 a u buněčné linie HL60 a sledovali vliv na fragmentaci deoxyribonukleové kyseliny. Stanovili jsme množství etidium bromidu, které se vyeluuje při elektroforéze nukleových kyselin na svarovém nosiči do elektroforetického pufru při jedné elektroforéze. Testovali jsme odolnost různých typů ochranných rukavic, které se běžně v molekulárně biologických laboratořích používají při práci s touto látkou. V poslední části diplomové práce jsme posuzovali dekontaminační metody pro etidium bromid a provedli jsme teoretický odhad množství etidium bromidu, které se z molekulárně genetických laboratoří dostane do odpadních vod při jeho likvidaci.This thesis is focused on toxicity and mutagenity of ethidium bromide. Effects of ethidium bromide on life organisms are observed on the basis of its chemical, physical and biological properties. Orientation test of ethidium bromide toxicity was done by means of biological model of protozoan Paramecium caudatum. We evaluated the influence of ethidium bromide on cellular line P3HR1 using fluorescent preparation. We also observed the influence of ethidium bromide on DNA fragmentation of cell line HL60. Using electrophoresis of nucleic acids, we established the amount of ethidium bromide which eluted to electrophoretical buffer. The resistance of protective gloves, which are currently used in molecular biological laboratories, was tested against effect of ethidium bromide. Finally we evaluated the methods of decontamination. We also estimated amount of ethidium bromide which gets to effluent from molecular biological laboratories.Katedra biologických a biochemických vědDokončená práce s úspěšnou obhajobo