Orientadora: Enilze M.S.F.RibeiroCo-orientadora: Ilce Mara de Syllos CólusInclui apêndiceTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 2007Inclui bibliografia e anexosÁrea de concentração: Genétic

Guembarovski, Roberta Losi

Orientadora: Enilze M.S.F.RibeiroCoorientadora: Ilce Mara de Syllos CólusInclui apêndiceTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 2007Inclui bibliografia e anexosÁrea de concentração: GenéticaResumo: Os cânceres de cabeça e pescoço, incluindo os da cavidade bucal, apresentam uma alta
incidência no Brasil e a sobrevida média de aproximadamente cinco anos permanece como
uma das menores entre os principais tipos de tumores malignos. Existe uma correlação entre
enzimas envolvidas no metabolismo de xenobióticos, o uso do tabaco e a suscetibilidade
genética a este tumor. Alterações genéticas no braço curto do cromossomo 3 (3p), sugerem
que esta região possa conter genes supressores tumorais, como os já mapeados RARB, FHIT e
VHL, envolvidos na etiologia desta neoplasia. No presente estudo foram avaliados genes
candidatos de suscetibilidade ao câncer (CYP1A1, GSTM1 e GSTT1) em 91 pacientes
portadores de carcinomas epidermóides bucais e em 81 controles sem história de neoplasias,
pareados por idade, sexo, etnia e hábito tabagista. O envolvimento da região 3p foi
investigado quanto à perda de heterozigose (LOH) pela análise de sete marcadores
microssatélites em 75 dos pacientes da amostra. PCR-RFLP e PCR-Multiplex foram utilizadas
na detecção das variantes dos genes do metabolismo. Nas análises de LOH, foram utilizados
DNAs sangüíneos e tumorais e as reações de PCR foram realizadas utilizando-se iniciadores
marcados com agentes fluorescentes (D3S1286, D3S1263, D3S1274, D3S1581, D3S1300,
D3S1079 e D3S1307). A análise da variância e o teste do Qui-Quadrado foram utilizados,
respectivamente, na comparação entre as médias dos tamanhos tumorais e na análise de
parâmetros histopatológicos (tamanho do tumor, invasão de linfonodos regionais e grau de
diferenciação tumoral) e clínico (óbito), para os dez marcadores moleculares. O estudo de
associação caso-controle indicou ausência de associação positiva ou negativa: CYP1A1
(OR=1,24 – IC95%=0,67-2,31); GSTM1 (OR=0,61 – IC95%=0,33-1,11) e GSTT1 (OR=1,24
– IC95%=0,65-2,38). A análise combinada dos genótipos também mostrou ausência de
associação: (OR=0,94 – IC95%=0,42-2,10) para indivíduos com dois genótipos considerados
de risco e (OR=0,88 – IC95%=0,25-3,17) para indivíduos com três genótipos considerados de
risco. Na análise dos parâmetros histopatológicos e clínicos, não foram detectadas diferenças
estatisticamente significativas. Em relação aos marcadores microssatélites, em todos os locos
analisados foram encontradas freqüências de LOH elevadas, variando de 37,1% para o
marcador D3S1263 a 55,2% para o marcador D3S1286. Dos sete marcadores analisados, seis
(D3S1286, D3S1079, D3S1300, D3S1274, D3S1307 e D3S1581) mostraram freqüências de
LOH próximas ou superiores a 50%. A análise da freqüência de LOH em locos combinados
também mostrou uma alta taxa de perda alélica, variando de 79,1% (em pelo menos um dos
locos) a 23,6% (em quatro ou dos mais locos). O parâmetro invasão de linfonodos regionais
apresentou um resultado significativo para dois dos sete marcadores analisados: D3S1263
(x²
1=8,94; P<0,01) e D3S1307 (x²
1=5,64; P<0,05). Com base nestes resultados, concluímos
que, nesta amostra, as variantes alélicas dos genes candidatos de suscetibilidade CYP1A1,
GSTM1 e GSTT1 não influenciaram o desenvolvimento dos tumores bucais, porém, as altas
taxas de LOH ressaltam a importância da região cromossômica 3p e dos genes RASSF1,
RARB, FHIT e VHL no desenvolvimento deste tipo de neoplasia.The head and neck tumors, including oral cavity, present a high incidence in Brazil and the
median survival of up five years continues one of the lowest among the common types of
cancers. Many studies have been demonstrating the importance of the correlation between
xenobiotic metabolizing enzymes, the use of tobacco and the susceptibility to oral cancer.
Genetic alterations in the short arm of chromosome 3 (3p), suggest that this region may
contain tumor suppressor genes, as the already mapped RARB, FHIT and the VHL, involved
in the etiology of this neoplasia. In the present study, putative cancer susceptibility genes
(CYP1A1, GSTM1 and GSTT1) were evaluated in 91 patients with oral squamous cell
carcinomas and in 81 healthy controls, matched by age, gender, ethnic group and smoking
habit. Loss of heterozygosity (LOH) at 3p region was investigated using microsatellite
markers analysis in 75 patients. PCR-RFLP and PCR-Multiplex were used to detect genes
variants. Peripheral blood DNA as control and tumor DNA were used to perform LOH
analysis and the PCR reactions were performed with labeled primers with fluorescents agents
(D3S1286, D3S1263, D3S1274, D3S1581, D3S1300, D3S1079, D3S1307). The variance
analysis and the Chi-square test were used respectively, to compare the tumour size mean and
in the analysis of the histopathological (tumor size, lymph node invasion and tumor
differentiation) and clinical (death) parameters, for the ten molecular markers. The casecontrol
association study did not detect positive or negative association: CYP1A1 (OR=1,24 –
IC95%=0,67-2,31); GSTM1 (OR=0,61 – IC95%=0,33-1,11) and GSTT1 (OR=1,24 –
IC95%=0,65-2,38). The combining genotypes analysis also showed an absence of association:
(OR=0,94 – IC95%=0,42-2,10) for individuals with two considered risk genotypes and
(OR=0,88 – IC95%=0,25-3,17) for individuals with three considered risk genotypes. When
the analysis of the histopathological and clinical parameters were performed no statistical
significative differences were found. For microsatellites markers, in all loci analyzed we
found a high frequency of LOH, varying of 37.1% for the marker D3S1263 to 55.2% for the
marker D3S1286. Among the seven markers analyzed, six (D3S1286, D3S1079, D3S1300,
D3S1274, D3S1307 and D3S1581) showed frequencies near or superior to 50%. The
combining loci analysis also showed a high frequency of allelic loss, varying of 79.1% (in at
least one locus) to 23.6% (in four or more locus). A significative result in two out of seven
markers analyzed: D3S1263 (x²
1=8.94; P<0.01) and D3S1307 (x²
1=5.64; P<0.05) was seen in
the analysis of lymph node invasion. Based in these results, we conclude that, in this sample,
the allelic variants of the putative susceptibility genes CYP1A1, GSTM1 and GSTT1 did not
have influence in the development of oral cancer, however, the high frequencies of LOH point
to the importance of the genomic region 3p and the genes RASSF1, RARB, FHIT and VHL in
the development of these neoplasia

Análise de associação dos genes CYP1A1,GSTM1,GSTT1,GSTT1 e da perda de heterozigose em 3p em portadores de carcinomas bucais /

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