Analisi della sovraespressione del fattore PDGF-B sul comportamento delle cellule della cresta neurale durante lo sviluppo embrionale di Xenopus laevis
RIASSUNTO
Il “pathway” del fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGF) esercita funzioni multiple durante lo sviluppo dei mammiferi. Le alterazioni della segnalazione del PDGF-B possono avere gravi ripercussioni sullo sviluppo del sistema nervoso centrale, in varie malattie iperproliferative tra cui i gliomi, tumori cerebrali gliali aggressivi e pressoché incurabili. Recenti studi sui meccanismi cellulari della progressione del glioma guidata dal PDGF-B e dal suo mantenimento indicano che il PDGF-B, induce la perdita della cosiddetta inibizione da contatto cellulare favorendo l'infiltrazione e la motilità delle cellule tumorali.
Su queste basi durante il mio lavoro di tesi di laurea ho preso parte a un progetto nato in collaborazione con il Dott. Paolo Malatesta dell’Istituto Tumori di Genova, che ha lo scopo di studiare dei meccanismi molecolari e cellulari coinvolti nelle modificazioni dei contatti cellula-cellula in risposta all’attivazione del sistema di segnalazione mediato dal PDGF-B. In particolare ho studiato il comportamento delle cellule della cresta neurale cranica in seguito a sovraespresssione del PDGF-B, la loro adesione cellulare e la migrazione in vivo in embrioni di Xenopus laevis. Queste cellule, infatti, sono un ottimo sistema modello per studiare eventi di motilità cellulare in vivo in quanto vanno incontro ad un processo di trasformazione epitelio-mesenchimatica e migrano attivamente durante l’embriogenesi.
Durante il mio internato di tesi, mi sono inizialmente occupata del clonaggio del cDNA per il PDGF-B di Xenopus e umano mediante RT-PCR. Successivamente ho effettuato un clonaggio di questi due geni in uno specifico vettore di espressione (pCS2+). Ciò mi ha permesso di preparare mRNA trascritti in vitro da microiniettare in embrioni di Xenopus a stadio di 2 o 4 cellule per effettuare esperimenti di sovraespressione genica. Il fenotipo risultante è stato analizzato a vari stadi di sviluppo tramite ibridazione in situ “whole mount” per visualizzare con specifici “markers” (EphB1, EphrinB2, FoxD3, Has1, N-cad, Slug, Twist) il comportamento delle cellule delle creste neurali craniche durante le prime fasi di sviluppo in cui avviene la transizione epitelio-mesenchimale e durante le successive fasi di migrazione delle creste neurali all’interno delle tasche faringee.
I risultati ottenuti suggeriscono un potenziale ruolo del PDGF-B nel regolare il comportamento delle cellule delle creste neurali in Xenopus. Inoltre la comparazione del fenotipo che si osserva in embrioni di Xenopus microiniettati con il PDGF-B umano e di Xenopus indica che si tratta di un gene evolutivamente conservato.
E’ auspicabile che l’insieme di questi dati possa contribuire a chiarire le basi molecolari della tumorigenicità indotta da PDGF-B nell’ottica di futuri approcci terapeutici