Análise funcional do gene da proteína 14-3-3 de Paracoccidioides brasiliensis

Abstract

A paracoccidioidomicose (PCM) é micose profunda causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis (Pb), endêmica na América Latina, principalmente no Brasil. A capacidade de P. brasiliensis de não só provocar doença humana, mas também de causar micose com grande variedade de manifestações clínicas, desde formas localizadas até doença disseminada, evoluindo para letalidade, depende provavelmente da virulência do fungo, da habilidade deste em interagir com as estruturas superficiais do hospedeiro e invadi-las, e da resposta imunológica deste último. O sucesso da colonização dos tecidos do hospedeiro pelo fungo é um evento complexo, geralmente envolvendo um ligante codificado pelo patógeno (adesinas) e um receptor da célula. Uma adesina de 30 kDa de P. brasiliensis, ligante de laminina, foi caracterizada através de seqüenciamento de aminoácidos, mostrando que esta é uma proteína 14-3-3 envolvida na adesão deste fungo às células epiteliais. Estas formam uma família de proteínas diméricas, ácidas e estão presentes em múltiplas isoformas em muitos organismos eucariotos. Com o intuito de se estudar sua funcionalidade em P. brasiliensis, pretendeu-se clonar, caracterizar e utilizar como hospedeiro do gene desta proteína a levedura Saccharomyces cerevisiae. Para tanto, as seqüências gênicas da adesina 14-3-3 de isolados de P. brasiliensis obtida pela clonagem do cDNA em vetores bacterianos foram utilizadas para obtenção de um homólogo funcional em S. cerevisiae. A capacidade do gene da 14-3-3 de P. brasiliensis ser um homólogo funcional, aderir e invadir as células epiteliais tratadas deve ser avaliada utilizando o modelo pré-existente de culturas celulares in vitro de linhagens humanas. Assim, neste estudo além da clonagem, expressão da 14-3-3 de Pb e obtenção do homólogo funcional do gene desta proteína em S. cerevisiae, foi iniciada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo