A New Method for Measuring the Dynamic Shape Change of Platelets

Abstract

Background: Platelet shape change is a dynamic process that has been classified in different types. Exact documentation of platelet structure needs an improved method of measuring platelet shape. Methods: 10 l of platelet-rich plasma (PRP) from anticoagulated whole blood (3.2% buffered sodium citrate 0.105 mol/l) was put onto a glass slide covered with a cover slip. By use a of dark field light microscope connected with a CMOSCamera a photographic snap-shot was taken after 5 and 30 min. Diameter of platelets and length of filopodia were measured with a self-developed plugin for ImageJ software. Statistic calculation was performed with Excel WinSTAT Microsoft software. Results: We showed a swelling of the granulomer from 2.06 ± 0.56 m to 2.33 ± 0.59 m (p < 0.05), a reduction of pseudopodia (2.10 ± 0.94 vs. 1.78 ± 1.04 m; p < 0.05) in conjunction with an increase of hyalomer diameter from 3.29 ± 0.83 to 3.50 ± 0.85 m (p < 0.05), and an increase of pseudopodia length from 2.68 ± 1.45 m to 3.67 ± 1.79 m (p < 0.005) in conjunction with an increase of hyalomer diameter from 6.58 ± 1.91 m to 7.94 ± 1.87 m (p < 0.05). Conclusion: We revealed and documented a dynamic change of platelet size and filopodia structure in PRP. This method allows an exact analysis of platelet size and surface structures.Hintergrund: Der thrombozytäre Formwandel (engl. shape change) ist ein dynamischer Prozess, für den eine Klassifikation nach Typen eingeführt worden ist. Für die genaue Dokumentation der dynamischen Änderungen der Plättchenstruktur ist eine verbesserte Messmethode notwendig. Methoden: 10 l plättchenreichen Plasmas (PRP) aus antikoaguliertem Vollblut (3,2% gepuffertes Natriumcitrat, 0,105 mol/l) wurden auf einen Objektträger aufgebracht und mit einem Deckglas abgedeckt. Die digitale mikrofotografische Dokumentation 5 und 30 min nach der Präparation erfolgte unter Verwendung eines mit einer CMOS-Kamera verbundenen Dunkelfeldmikroskops. Durchmesser der Plättchen und Länge der Filopodien wurden mit einem selbstentwickelten Plugin für die Software ImageJ (NIH) vermessen. Die statistische Auswertung erfolgte mit Microsoft Excel WinSTAT. Ergebnisse: Ein Anschwellen des Granulomers von 2,06 ± 0,56 m auf 2,33 ± 0,59 m (p < 0,05), eine Verkürzung der Pseudopodien (2,10 ± 0,94 vs. 1,78 ± 1,04 m; p < 0,05) in Verbindung mit einer Zunahme der Hyalomer-Diameter von 3,29 ± 0,83 auf 3,50 ± 0,85 m (p < 0,05) und eine Verlängerung der Pseudopodien von 2,68 ± 1,45 m auf 3,67 ± 1,79 m (p < 0,005) in Verbindung mit einer Zunahme der Hyalomer-Diameter von 6,58 ± 1,91 m auf 7,94 ± 1,87 m (p < 0,05) wird dargestellt. Schlussfolgerungen: Eine dynamische Änderung der Plättchengröße und Filopodien- Struktur wird gezeigt und dokumentiert. Die Methode erlaubt eine genaue Analyse und Dokumentation dynamischer Veränderungen von Plättchen im PRP