Expression und Regulation von Membranproteinen am Beispiel der Cytochrom $\it {bd}$-Oxidase aus $\textit {Synechocystis sp.}$ PCC 6803

Abstract

Durch Etablierung einer schnellen reproduzierbaren RNA Präparation aus $\textit {Synechocystis sp.}$ PCC 6803 wurde die standardmäßige Nutzung der qRT-PCR ermöglicht, die zur Charakterisierung von Membranproteinen, sowie der Untersuchung von Expressionsproblemen im initialen Schritt genutzt werden kann. Die heterologe Expression eines Membranproteins wurde am Bsp. von Bacteriorhodopsin gezeigt. Zum ersten Mal konnte ein direkter Beweis für die Präsenz der Cytochrom $\it {bd}$-Oxidase in Synechocystis erbracht und gezeigt werden, dass die Regulation wahrscheinlich auf Translationsebene stattfindet. CydA konnte durch einen Peptid-Antikörper (AK) detektiert werden, dessen Monospezifität Experimente zur Lokalisation des Komplexes in $\it {Synechocystis}$ erlaubt. Die Aufreinigung getaggten Proteins aus $\it {E.coli}$ lieferte nahezu reines CydB zu AK-Gewinnung. Funktionelle Untersuchungen einer Komplementationsmutante bestätigen die Beteiligung des slr1379/slr1380 kodierten Komplex am photosynthetischen Elektronentransport