Faculty of Veterinary Medicine University of Zagreb
Abstract
Three stable strains of hybridoma cells (2H10, 3A8, 1B6) producing monoclonal antibodies (Mab) reacted with Protein Purified Derivative (PPD) Mycobacterium bovis were obtained. They were incapable of binding to PPD M. avium and whole cells M. bovis, M. kansasii, M. scrofulaceum as well as to their soluble and sonicated antigens. PPD M. bovis was attached to the solid phase via Mab which were directed to its protein with a molecular weight of 66 kDa. The diagnostic efficiency of sandwich ELISA was tested as compared with skin test. Blood samples were obtained from 849 cows belonging to farms unaffected and farms affected by tuberculosis. Ninety cows (10.6%) reacted to PPD M. bovis, but among them only 22 cows (2.6%) had a positive ELISA. Average titre of M. bovis specific antibodies detected in serum samples by ELISA was equal to 1:920 – 1:6400. Diagnostic value of ELISA and skin test was determined by autopsy of 12 cows. There were M. bovis specific antibodies at rather high titres in the blood samples of 9 cows which showed positive to skin test. Three cows developed a response to PPD M. bovis but in the blood samples of these animals we failed to detect any specific antibodies. Results of autopsy showed that all cows with positive ELISA and skin test had pathological findings in lungs and lymphatic nodes specific for tuberculosis, but internal organs of cows reacted only to skin test had no alterations. The results of our research testify to the high specificity and efficiency of Mab-based sandwich ELISA in isolating animals infected with tuberculosis and represent an evaluation of the actual epizootic situation.Polučena su tri stabilna soja hibridomskih stanica (2H10, 3A8, 1B6) za proizvodnju monoklonskih protutijela (Mab) koja su reagirala s proteinskim pročišćenim derivatom (PPD) bakterije Mycobacterium bovis. Proizvedena monoklonska protutijela nisu se mogla vezati na PPD vrste M. avium i cijele stanice vrsta M. bovis, M. kansasii i M. scrofulaceum kao ni za njihove topive i ultrazvukom obrađene antigene. PPD vrste M. bovis bio je vezan na čvrstu fazu preko monoklonskih protutijela koja su usmjerena za njen protein molekulske mase 66 kDa. Dijagnostička učinkovitost sendvič imunoenzimnog testa bila je uspoređena s kožnim testom. Krvni uzorci bili su uzeti od 849 krava koje su potjecale iz tuberkulozom zahvaćenih i nezahvaćenih uzgajališta. Devedeset krava (10,6%) reagiralo je na PPD M. bovis, ali su među njima samo 22 (2,6%) bile pozitivne imunoenzimnim testom. Prosječni titar specifičnih protutijela za M. bovis ustanovljen u uzorcima seruma imunoenzimnim testom bio je 1:920 do 1:6400. Dijagnostička vrijednost imunoenzimnog i kožnog testa bila je određena autopsijom 12 krava. Specifična protutijela za M. bovis u visokom titru ustanovljena su u krvnom serumu devet krava koje su bile pozitivne na kožni test. Tri krave su bile pozitivne kožnim testom, ali u njihovim krvnim uzorcima nisu ustanovljena specifična protutijela. Rezultati razudbe pokazali su da je u svih krava s pozitivnim ELISA i kožnim testom, patološki nalaz na plućima i limfnim čvorovima bio specifičan za tuberkulozu. Na unutarnjim organima krava koje su reagirale samo na kožni test nije bilo nikakvih promjena. Rezultati istraživanja potvrđuju visoku specifičnost i učinkovitost sendvič imunoenzimnog testa temeljenog na monoklonskim protutijelima. Test se može rabiti za otkrivanje i izdvajanju tuberkuloznih životinja kao i za prikaz procjene aktualnog epizootiološkog stanja
