Hyphenated techniques liquid chromatography-mass spectrometry: basic methodology and applicati ons

Abstract

Tekućinska kromatografi ja (LC) osnovna je višenamjenska separacijska tehnika koja se primjenjuje u modernim biološkim znanosti ma i srodnim područjima molekularne biologije kao što su analiti čka ili preparati vna kemija. Za razliku od mnogih drugih separacijskih tehnika koje nisu pogodne za razdvajanje termički nestabilnih molekula (npr. plinska kromatografija, GC) ili onih koje se ne mogu direktno spregnuti (npr. izoelektrično fokusiranje, IEF), tekućinska kromatografija može uspješno poslužiti za razdvajanje širokog raspona molekula kao što su to polimeri, male molekule farmaceutika ili njihovih metabolita, kao i pepti da i proteina. Odabirom takve metode tekućinske kromatografi je koja ne šteti analizi spektrometrijom masa (hlapljivi puferi, stabilan i nizak protok, upotreba polarnih organskih otapala), tekućinski kromatograf može se jednostavno spregnuti sa spektrometrom masa. Izvor iona, analizator (ili kombinacija više analizatora u istom instrumentu, tzv. tandemska spektrometrija masa) i detektor iona odabiru se u ovisnosti o vrstama analiza, a koje pak mogu biti jednostavne analize određenog iona ili kvalitati vno substrukturalne i kvanti tati vne analize kompleksnih smjesa. Da bi se olakšalo određivanje strukture ili kvanti tati vna analiza, u proteklom desetljeću su razvijene različite programske aplikacije i pretraživači baza podataka.Liquid chromatography (LC) is a basic versati le separati on technique widely used in modern life sciences especially in the fi elds closely related to molecular biology, namely in the analytical or preparative chemistry. Unlike many other separati on techniques, which are unsuitable for thermally degradable molecules (e.g. gas chromatography, GC), or which are not feasible for on-line coupling (e.g. isoelectric focusing, IEF), liquid chromatography can efficiently separate a very wide range of large molecules like polymers, peptides and proteins as well as small molecules like drug or drug metabolites. Choosing the proper LC method that uti lize mass spectrometry (MS) friendly conditi ons (volati le buff ers, stable and low fl ow rate, polar organic solvents etc.), liquid chromatography system can be easily hyphenated to mass spectrometer. Ionizati on source, analyzer (or combinati on of more analyzers in one instrument, the so called tandem mass spectrometry) and ion detector are selected according to the analysis requirements that might range from simple one ion qualitative analysis to substructural qualitati ve, and quanti tati ve analysis of complex mixtures. To facilitate elucidati on of structure or quanti tati ve analysis different soft ware applicati ons and data bases search engines were developed during the last decade

    Similar works