Uvod: Primus Ultra2 je analizator na kojem se metodom tekućinske kromatografije visoke djelotvornosti (engl. high-performance liquid chromatography, HPLC) pomoću ionske izmjene obavlja kvantitativna i kvalitativna analiza frakcija hemoglobina: u 4 minute moguće je odrediti točnu koncentraciju HbF, HbA2, HA0 i detektirati druge vrste hemoglobina. Cilj istraživanja je ocjena analitičkog učinka analizatora Primus Ultra2 u rutinskoj procjeni sadržaja HbA2, najvažnijeg testa za identifikaciju nosioca β-talasemije.
Materijali i metode: Provedena su istraživanja nepreciznosti, linearnosti i netočnosti prema CLSI standardima (engl. Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI) i smjernicama proizvođača. Pouzdanost mjerenja koncentracije HbA2 u svrhu određivanja β-talasemije ispitana je na 300 uzoraka bolesnika s prethodno postavljenom dijagnozom β-talasemije.
Rezultati: Nepreciznost. Koeficijent varijacije (engl. coeficient of variation, CV) unutar serije kod normalne koncentracije HbA2 (2,2%) iznosio je 1,9%, a kod povišene koncentracije (5,5%) 1,3%. CV iz serije u seriju iznosili su 2,4% (normalna koncentracija) i 1,7% (povišena koncentracija). CV iz dana u dan bili su 3,0% (normalna koncentracija) i 2,7% (povišena koncentracija). Ukupni koeficijenti varijacije bili su 4,4% (normalna koncentracija) i 3,5% (povišena koncentracija). Linearnost. Y = 1,089x + 0,01; R2= 0,992 (raspon 2,4-5,0%). Izmjerene su vrijednosti dobro korelirale s očekivanima; prosječno iskorištenje bio je 99%. Netočnost. Kod kontrolnog uzorka normalne koncentracije greška je iznosila 1,6% ± 0,26%, a kod kontrolnog uzorka povišene koncentracije 5,2% ± 0,19%. Referentni raspon bio je 0,9-3,0% (srednja vrijednost 1,9%, ± 2,5 SD). Svi ispitani nosioci β-talasemije imali su povećanu koncentraciju HbA2 u krvi [4,7% (3,3-6,9%)].
Zaključak: Analizator Primus Ultra2 omogućuje brzo i pouzdano razdvajanje različitih frakcija hemoglobina. Mjerenje koncentracije HbA2 točno je i ponovljivo, što je neophodno zbog male razlike između normalnih i patoloških vrijednosti. Postoji jasna razlika u koncentracijama HbA2 između zdravih ispitanika i nosioca β-talasemije. Granična se vrijednost za zdravu populaciju može se postaviti na 3,3% HbA2. Određivanje koncentracije HbA2 na analizatoru Primus Ultra2 je pogodna metoda za brzo probiranje unutar populacije na nosioce β-talasemije.Background: Primus Ultra2 is a HPLC ion exchange analyzer for qualitative and quantitative hemoglobin fraction analysis: in 4 minutes it quantifies HbF, HbA2, HA0 and flags abnormal hemoglobins. The aim of the study was to evaluate analytical performance of Primus Ultra2 analyzer for routine estimation of HbA2, a critical test to identify β-thalassemia carriers.
Methods: The imimprecision, linearity and inaccuracy studies were performed according to CLSI and manufacturer\u27s guidelines. The reliability of HbA2 measurements for detection of β-thalassemia was studied by analysis of 300 samples from patients with previous diagnosis of the disease.
Results: Imprecision. Within run coefficient of variation (CV) was 1.9% for normal HbA2 level (2.2%) and 1.3% for elevated level (5.5%). Between run CV was 2.4% for normal level and 1.7% for elevated level. Between-day CV was 3.0% for normal level and 2.7% for elevated level. Total CV was 4.4% for normal level and 3.5% for elevated level. Linearity. Y = 1.089x + 0.01; R2 = 0.992 (range 2.4-5.0%). The measured values correlated with the expected ones; the mean proportion recovered was 99%. Inaccuracy. The mean was 1.6% (SD 0.26%) for normal control and 5.2% (SD 0.19%) for high control. Reference range was 0.9-3.0% (mean 1.9%±2.5 SD). All β-thalassemia carriers had elevated HbA2 blood concentrations (mean 4.7%, range 3.3-6.9%).
Conclusions: Primus Ultra2 provides a rapid and reliable separation of different hemoglobins. HbA2 measurement is accurate and reproducible, which is needed due to the slight difference between normal and pathologic values. There is good differentiation of HbA2 values between normal subjects and β-thalassemia carriers. The cut off limit can be set at 3.3% HbA2. This is a suitable method for rapid population screening for β-thalassemia carriers
