Faculty of Veterinary Medicine University of Zagreb
Abstract
Ten, 4- to 6-week-old BALB/c mice were randomly assigned to either control (non-vitrified, n = 5) or treatment (vitrified, n = 5) groups. Ovaries in the vitrified group were frozen sequentially by immersion into two vitrification solutions VS1: 10% ethylene glycol (EG) + 10% DMSO in holding medium (TCM-199 + 20% FBS) and VS2: 20% EG + 20% DMSO in holding medium. After thawing at 37 °C in 1.0 M sucrose, vitrified as well as non-vitrified ovaries were serially sectioned and examined histopathologically. The proportion of atretic follicles between non-vitrified and vitrified samples was significantly different (36.5 vs. 78.9%, P<0.001). No statistical difference due to vitrification was observed for the percentage of small follicles between the two experimental groups. In contrast, the rate of atresia for the growing and antral follicles in the vitrified ovaries was statistically higher than in the non-vitrified group (70.1 vs. 30.6%, P<0.001). Although many antral follicles were atretic following vitrification, sufficient follicles, especially small class, survived. Therefore, vitrification using EG and DMSO is an efficient procedure for cryopreservation of ovaries.U istraživanje su uzete dvije skupine BALB/c miševa u dobi od četiri do šest tjedana. Ukupno je bilo 10 miševa podijeljenih u pokusnu (n=5) i kontrolnu skupinu (n=5). Jajnici vitrificirane skupine bili su smrznuti sekvencionirano koristeći se uranjanjem u dvije vitrifikacijske otopine. Jedna otopina sadržavala je 10% etilen glikola (EG) + 10% DMSO u mediju za održavanje (TCIM-199 + 20% fetalnoga goveđega seruma), a druga otopina sadržavala je 20% EG + 20% DMSO u mediju za održavanje). Nakon odmrzavanja na 37 °C u 1,0 M otopini saharoze, jajnici obje skupine (vitrificirani i nevitrificirani) bili su serijski rezani i patohistološki pretraženi. Udio atretičnih folikula između vitrificirane i nevitrificirane skupine značajno se razlikovao (36,5 prema 78,9%, P<0,001). Nije ustanovljena statistički značajna razlika s obzirom na vitrifikaciju za udio malih folikula između obje skupine. Suprotno tome, postotak atrezije za rastuće i antralne folikule u vitrificiranim jajnicima bio je značajno veći nego u skupini u kojoj nije provedena vitrifikacija (70,1 prema 30,6%, P<0,001). Usprkos tome što su mnogi antralni folikuli bili atretični nakon vitrifikacije, preživjela je dovoljna količina folikula, osobito malih. Stoga se zaključuje da je vitrifikacija primjenom EG i DMSO učinkovit postupak za čuvanje smrznutih jajnika
