Primjena kulture stanica prednjeg režnja hipofize u toksikološkim istraživanjima

Abstract

High density plating procedure was used to evaluate the effect of atrazine on anterior pituitary cells of rats in monolayer culture. Collagenase-dispersed pituitary cells plated in suspension with medium-199 and 10% foetal calf serum attached quantitatively to plastic surfaces within 24 hours. Electron microscopy showed subpopulations of different cell types. After prolonged cultivation, most cells established small colonies with extensive contacts among them. Cell-to-cell formation of aggregates was significant and the colonies manifested morphological changes. The cells retained their enzymatic activity, converting testosterone into 5alfa-dihydrotestosterone by enzyme 5alfa-reductase. Immunohistochemical techniques facilitated differentiation of gonadotrophs producing follicle stimulating (FSH) and luteinising hormones (LH). Atrazine in concentrations of 5 to 50 µg/ml of medium was associated with a significant reduction in the number of viable cells within 72 hours. The results suggest that the pituitary cell culture may prove useful in toxicological testing of various toxic compounds and reduce or replace in vivo animal experiments.Atrazin, selektivni s-triazinski herbicid, danas se rabi u velikim količinama za zaštitu kukuruznih polja, a zbog svoje liposolubilnosti i perzistentnosti u okolišu ulazi u hranidbeni lanac. In vitro sustavi tkiva i organa sisavaca uz in vivo pokuse još i danas su pretežite tehnike u toksikologiji koje se pouzdano primjenjuju. Potrebe za smanjenjem broja pokusa na životinjama dovele su do intenzivna razvoja tehnika sa životinjskim stanicama, bilo da se radi o primarnim kulturama ili o staničnim linijama. Primarne kulture stanica središnjega živčanog sustava nisu do danas doživjele punu primjenu. Primjena životinjskih stanica mnogo je jeftinija tehnika koja omogućuje provođenje istodobnog ispitivanja na velikom broju uzoraka. Cilj istraživanja bio je ispitati toksičnost atrazina u in vitro uvjetima na modelu kulture stanica hipofize, koje su odgovorne za normalno funkcioniranje reprodukcijskog procesa. U radu se dobrom izolacijskom metodom i visokim stupnjem uspješnog uspostavljanja kulture stanica, mogao pratiti utjecaj atrazina na razini staničnih promjena. Stanice raspršene kolagenazom u suspenziji s medijem 199 i 10%-tnim telećim serumom prihvatile su se za plastičnu podlogu unutar 24 sata. Elektronskom mikroskopijom nađeni su različiti tipovi stanica. Nakon produljene kultivacije, najveći broj stanica stvorio je male kolonije s uočljivim vezama između stanica. Stanice su pokazale dobru enzimsku aktivnost pri pretvorbi testosterona u aktivni metabolit 5alfa-dihidrotestosteron. Imunohistokemijskim metodama utvrđene su stanice koje sintetiziraju hormone što stimuliraju razvoj folikula (FSH) i hormone luteinizacije (LH). Atrazin je dodan kulturi stanica hipofize u koncentracijama 5–50 µg/ml medija koji je sadržavao 3x105 stanica. Tijekom 24, 48 i 72 sata nađena su značajna smanjenja broja živih stanica, od 36 do 46%. Učinci su ovisili o dozi atrazina. Rezultati upućuju na to da se kulture stanica adenohipofize mogu uspješno rabiti u budućim istraživanjima toksičnosti različitih tvari radi smanjenja ili zamjene in vivo pokusa na životinjama