Aeromonas hydrophila i druge bakterije roda Aeromonas ubikvitarne su u vodenom okolišu i dio su normalne bakteriološke flore mlađi kalifornijske pastrve. Infekcije uzrokovane tim bakterijama registrirane su u mnogim zemljama svijeta. U ovom su radu prikazana naša iskustva i spoznaje s aeromonasnom bakterijemijom, kao uzrokom uginuća mlađi kalifornijske pastrve. U studenome 2003. pastrvska mlađ u dobi od 7 mjeseci počela je iznenada ugibati. U Laboratorij za istraživanje i razvoj akvakulture dostavljeno je 17 uzoraka riba, uginulih i moribundnih pastrvica, koje su odmah i pregledane. Primjenom Api 20 NE testova identificiran je Aeromonas hydrophila / caviae tip I s 99,9 % točnosti (1 test protiv), odnosno Aeromonas hydrophila / caviae tip II s 99,5 % točnosti (1 test protiv) iz uzoraka uzetih iz jetre, slezene, bubrega, crijeva i očnih lezija. Svi izolirani i identificirani sojevi testirani su na osjetljivost prema antibioticima disk difuzijskom metodom. Utvrđena je najveća osjetljivost na flumekvin, a relativno slabija prema kloramfenikolu i enrofloksacinu. Liječenje je uspješno provedeno Flubactinom®.Aeromonas hydrophila and other members of Aeromonas genus are ubiquitus in aquatic environment and make part of normal bacterial flora of rainbow trout. Aeromonas spp. infections are worldwide registered. Here we present our experience and knowledge on Aeromonas bacteremia, which causes mortality of rainbow trout fry.
Rainbow trout fry, 7 month old, started to die in November 2003. Fish samples (17 samples) of dead and moribund fish were delivered to the Laboratory for aquaculture. With Api 20 NE tests Aeromonas hydrophila / caviae type I was identified with an average probability of 99.9 % (one test against), as well as Aeromonas hydrophila / caviae type II with an average probability of 99.5 % (one test against) from liver, spleen, kidney, intestines and damaged eye. All of isolated and identified samples were tested for antibiotic susceptibility by disc diffusion method. The test showed that specimens were most sensitive on flumequin, and relatively less sensitive on chloramphenicol and enrofloxacin. Therapy was successfully applied with Flubactin®

D. Kapetanović

E. Teskeredžić

Croatian

Hrčak - Portal of scientific journals of Croatia

ISSN 1330–061X UDK: 597.553.2.091:615.33CODEN RIBAEG Izvorni znanstveni ~lanakAEROMONASNA BAKTERIJEMIJA MLA\IKALIFORNIJSKE PASTRVE (ONCORHYNCHUSMYKISS), OSJETLJIVOST PREMAANTIMIKROBNIM TVARIMAD. Kapetanovi}, E. Teskered‘i}Aeromonas hydrophila i druge bakterije roda Aeromonas ubikvitarne su uvodenom okoli{u i dio su normalne bakteriolo{ke flore mla|i kalifornijskepastrve. Infekcije uzrokovane tim bakterijama registrirane su u mnogimzemljama svijeta. U ovom su radu prikazana na{a iskustva i spoznaje saeromonasnom bakterijemijom, kao uzrokom uginu}a mla|i kalifornijske pas-trve. U studenome 2003. pastrvska mla| u dobi od 7 mjeseci po~ela je iznenadaugibati. U Laboratorij za istra‘ivanje i razvoj akvakulture dostavljeno je 17uzoraka riba, uginulih i moribundnih pastrvica, koje su odmah i pregledane.Primjenom Api 20 NE testova identificiran je Aeromonas hydrophila /caviae tip I s 99,9 % to~nosti (1 test protiv), odnosno Aeromonas hydrophila /caviae tip II s 99,5 % to~nosti (1 test protiv) iz uzoraka uzetih iz jetre, slezene,bubrega, crijeva i o~nih lezija. Svi izolirani i identificirani sojevi testirani suna osjetljivost prema antibioticima disk difuzijskom metodom. Utvr|ena jenajve}a osjetljivost na flumekvin, a relativno slabija prema kloramfenikolu ienrofloksacinu. Lije~enje je uspje{no provedeno Flubactinom®.Klju~ne rije~i: kalifornijska pastrva, Aeromonas hydrophila / caviae.UVODPripadnici roda Aeromonas gram–negativne su {tapi}aste bakterije, oksidaza–pozitivne i fakultativno anaerobne, te fermentiraju glukozu. Ubikvitarne subakterije u vodenom okoli{u i ~ine dio normalne bakterijske flore mla|ikalifornijske pastrve (K a p e t a n o v i } i T e s k e r e d ‘ i }, 2003). Infekcije uzro-kovane vrstama roda Aeromonas registrirane su u mnogim zemljama u svijetu(A u s t i n i A u s t i n, 1999). Patolo{ke promjene kao posljedica infekcijeuklju~uju ulceracije na ko‘i, gnjiljenje repa i peraja, ulceracije oka, eritroder-Damir Kapetanovi}, dr. vet. med., dr. sc. Emin Teskered‘i}, znanstveni savjetnik,Institut Ru|er Bo{kovi}, Zavod za istra‘ivanje mora i okoli{a, Laboratorij za istra‘ivanjei razvoj akvakulture, Bijeni~ka cesta 54, 10000 Zagreb, Hrvatska, e–mail: kada@irb.hrRibarstvo, 62, 2004, (3), 95—102                D. Kapetanovi}, E. Teskered‘i}: Aeromonasna bakterijemija mla|i kalifornijske pastrve95  matitis, hemoragi~ne septikemije, bolest izbo~enih ljusaka (C i p r i a n o i sur.,2001). Akutni se oblik mo‘e o~itovati u obliku fatalne septikemije ~iji suuzro~nici Aeromonas hydrophila i Aeromonas caviae. Tijek infekcije toliko jebrz da riba ugine prije razvoja kompletne bolesti, izuzev{i nekoliko znakovabolesti. Kada su klini~ki znakovi infekcije prisutni, zara‘ene ribe pokazujuegzoftalmus i crvenilo ko‘e. Abdomen mo‘e biti nadut, {krge hemoragi~ne, apo ko‘i se razvijaju ~irevi (A u s t i n i A u s t i n, 1999). Zabilje‘eno je nekolikoslu~ajeva patolo{kih promjena na oku kao posljedica aeromonasne septikemije.Najprije bude zahva}eno jedno oko, proces se pro{iri na drugo oko, nakon ~eganastane puknu}e orbite koje uzrokuje sljepo}u i smrt (C i p r i a n o i sur., 2001).Sistemne su infekcije karakterizirane difuznom nekrozom u nekolikounutra{njih organa. Jetra i bubreg ciljni su organi akutne septikemije. Jetramo‘e postati blijeda ili zeleno obojena, a bubreg mo‘e biti nate~en i prhak.Slezena i srce nisu nu‘no o{te}eni. Crijeva i ‘eludac ~esto su nate~eni, upaljenii hemoragi~ni i mogu se izbo~iti iz abdomena. Crijevo ne sadr‘i hranu, a mo‘ebiti ispunjeno ‘u}kastim mukoznim sadr‘ajem (C i p r i a n o i sur., 2001).Budu}i da je rije~ o bakteriji koja ~ini dio normalne mikroflore mla|ikalifornijske pastrve, pojava bolesti ozna~uje uvjetnu infekciju (K a p e t a n o -v i } i T e s k e r e d ‘ i }, 2003). Zabilje‘ena je osjetljivost uzro~nika aeromonasnebakterijemije prema kloramfenikolu, florfenikolu, tetraciklinima, sulfonami-dima i nitrofuranima (C i p r i a n o i sur., 2001).Cilj na{eg rada bio je postavljanje etiolo{ke dijagnoze izolacijom i biokemij-skom tipizacijom uzro~nika bolesti, te utvr|ivanje njegove osjetljivosti naantibiotike.MATERIJAL I METODEUzorciU Laboratorij za istra‘ivanje i razvoj akvakulture Instituta »Ru|er Bo{kovi}«u Zagrebu dostavljeno je 17 uzoraka mla|i kalifornijske pastrve, uginulih imoribundnih pastrvica, prosje~ne mase 12,5 g i du‘ine 10,7 cm.Bakteriolo{ka pretragaUzorci za bakteriolo{ku pretragu uzimani su iz jetre, slezene, bubrega, kao iiz promjena na oku i upalnoga crijevnoga sadr‘aja. U‘arenom bakteriolo{komlopaticom spaljena je povr{ina organa, a zatim je bakteriolo{kom u{icom uzetuzorak iz unutra{njosti organa.Za izolaciju je rabljen Triptic soy agar (BBL). Nakon nacjepljivanja na agar,materijal je stavljen u termostat na 22 ºC na inkubaciju, tijekom 48–72 sata.Nakon inkubacije izrasle su kolonije precijepljene na nove podloge radidobivanja ~iste kulture. Purificirane bakterijske kolonije pregledane su mak-roskopski, razmazi su obojeni po Gramu, a identifikacija je provedena natemelju rezultata API 20 NE testova (bioMérieux, France).Ribarstvo, 62, 2004, (3), 95—102 D. Kapetanovi}, E. Teskered‘i}: Aeromonasna bakterijemija mla|i kalifornijske pastrve96Testirana je osjetljivost svih izoliranih i identificiranih sojeva na antibi-otike disk difuzijskom metodom (N a g l i } i sur., 1992). Upotrijebljeni sudiskovi proizvo|a~a BD–BBL: ampicillin (AM10), chloramphenicol (C30), en-rofloxacin (ENO5), erythromycin (E15), flumequin (AR30), nitrofurantion(F/M300), norfloxacin (NOR10), novobiocin (NB5), oxytetracycline (T30), peni-cilin (P10), piperacillin (PIP100), sulfamethoxazole + trimethoprim (SXT),tetracycline (TE30) i trimethoprim (TMP5). REZULTATIKlini~kom su pretragom utvr|ena krvarenja po {kr‘nim poklopcima, osnoviperaja i anusu, kao i bljedilo {krga (Slika 1). Od 17 pastrva, jedna nije imalajedno oko, a jedna je bila bez oba oka (Slika 2). Abdomen je bio pro{iren, ana pritisak iz anusa je izlazio teku}i sadr‘aj.Sl. 1. Aeromonasnabakterijemija:krvarenja po{kr‘nom poklopcu,osnovi peraja, okoanusa i korijenurepaFig. 1. Aeromonadaebacteraemia: haemor-rhagiae on the oper-cular area, at baseof fins, around anusand at the base oftail.Sl. 2. Aeromonasnabakterijemija: lezijena okuFig. 2. Aeromonadaebacteraemia: eyedamage.Ribarstvo, 62, 2004, (3), 95—102                D. Kapetanovi}, E. Teskered‘i}: Aeromonasna bakterijemija mla|i kalifornijske pastrve97  Patoanatomski, uo~eni su ascites i izrazito blijeda jetra. U nekih je ribabubreg bio pove}an. U ‘elucu se nalazio teku}i sadr‘aj pomije{an s plinom, acrijeva zahva}ena enteritisom bila su djelomi~no ispunjena ‘u}kastom teku-}inom (Slika 3). U dviju riba utvr|ena je prisutnost hrane.Bakteriolo{kom pretragom jetre, slezene i bubrega, kao i iz promjena nao~ima i iz upalnoga crijevnog sadr‘aja izolirane su okrugle, prozirne, bjeli~aste,glatke, uzdignute kolonije promjera 0,5–2 mm.Promatranjem pod mikroskopom razmaza obojenih po Gramu uo~ene sugram–negativne {tapi}aste bakterije.Na osnovi pozitivnih reakcija na oksidazu, uzro~nik je identificiran pri-mjenom API 20 NE testa. Biokemijske aktivnosti izolata utvr|ene API 20 NEsistemom sumirane su u Tablici 1. Oba tipa izoliranih uzro~nika odgovarajuza Aeromonas hydrophila / caviae, s tom razlikom da je to~nost tipa A.hydrophila / caviae tipa I iznosila 99,9 % (1 test protiv), a A. hydrophila /caviae tipa II to~nost je bila 99,5 % (1 test protiv).Rezultati ispitivanja osjetljivosti na djelovanje antimikrobnih tvari obajutipova A. hydrophila / caviae prezentirani su u Tablici 2.RASPRAVAKlini~ki znakovi oboljelih kalifornijskih pastrva utvr|eni prigodom pretrageodgovaraju onima ve} opisanima kao posljedica patogenoga djelovanja Aero-monas hydrophila / caviae (A u s t i n i A u s t i n, 1999; C i p r i a n o i sur., 2001).Svi izolati iz uzoraka uzetih za bakteriolo{ku pretragu pripadaju skupiniA. hydrophila / caviae, a to su potvrdili API 20 NE testovi ispitivanjabiokemijskih svojstava izoliranih bakterija. Sistem API 20 NE upotrijebljen jeza brzo odre|ivanje profila dobivenih izolata. Izolati su dobiveni iz razli~itihorgana oboljelih riba.Sl. 3. Aeromonasna bakteri-jemija: gastroenteritis (‘elu-dac ispunjen teku}inom izrakom)Fig. 3. Aeromonadae bacte-raemia: gastro–enteritis(gaster fulfil with liquidand air).Ribarstvo, 62, 2004, (3), 95—102 D. Kapetanovi}, E. Teskered‘i}: Aeromonasna bakterijemija mla|i kalifornijske pastrve98Na osnovi provedenih testova i odre|enih biokemijskih svojstava utvr|enasu dva tipa A. hydrophilae / caviae. A. hydrophila /caviae tip I razlikuje se odA. hydrophila /caviae tip II u posjedovanju arginin–dihidrogenaze (ADH), kaoi u sposobnosti fermentacije adipata (ADI).Dosada{nje spoznaje utvr|uju da A. hydrophila / caviae posjeduje ADH, ada je ADI negativna (J a n d a, 1985). Rezultati ispitivanja metabolizma argi-nina upu}uju na to da se argininom razli~ite bakterije koriste kao izvoromdu{ika, ugljika i energije (S h i r a i i M i z u g u c h i, 2003). Virulencija mikroor-ganizama ~esto je povezana s proizvodnjom pojedinih enzima. Katabolizamarginina preko arginin–dihidrogenaze mo‘e biti va‘an izvor energije za bak-terijski rast (A r e n a i sur., 1999). Isto tako, adipat se u stanici  –oksidacijomrazla‘e do sukcinil–CoA i acetil–CoA koji se dalje iskori{tavaju u energijskommetabolimu (T y k a e r i sur., 2002). Iako to~na uloga ovih dvaju biokemijskihTablica 1. Rezultati API 20 NE testovaTable 1. Results of API 20 NE tests.Testovi / Tests A. hydophila/caviaetype I type IINO3 — Nitrate reduction + +TRP — Indole production + +GLU — Acidification + +ADH — Arginine dihydrolase + –URE — Urease – –ESC — Hydrolysis ( –glucosidase) + +GEL — Hydrolysis (protease) + +PNG —  –galactosidase + +GLU — glucose + +ARA — arabinose + +MNE — mannose + +MAN — mannitol + +NAG — N–acetyl–glucosamine + +MAL — maltose + +GNT — gluconate + +CAP — caprate + +ADI — adipate + –MLT — malate + +CIT — citrate + +PAC — phenyl–acetate – –OX — oxidase + +Ribarstvo, 62, 2004, (3), 95—102                D. Kapetanovi}, E. Teskered‘i}: Aeromonasna bakterijemija mla|i kalifornijske pastrve99  parametara u metabolizmu Aeromonas spp. nije detaljnije istra‘ena, rezultatiupu}uju na njihov utjecaj na rezistenciju bakterija.Na{i rezultati upu}uju na razlike u pogledu rezistencije na antimikrobnetvari izme|u A. hydrophila / caviae tip I i A. hydrophila / caviae tip II. Ve}istupanj rezistencije zabilje‘en je kod A. hydrophila / caviae tip I, koja je ADHi ADI pozitivna. Oba izolirana tipa A. hydrophila / caviae pokazuju najve}uosjetljivost prema flumekvinu, a relativno manje prema kloramfenikolu ienrofloksacinu, {to upu}uje na smanjenu osjetljivost uzro~nika prema timantimikrobnim tvarima (C i p r i a n o i sur., 2001). ZAKLJU^AKRezultati bakteriolo{ke pretrage dostavljenih uzoraka kalifornijske pastrveupu}uju na zaklju~ak da je Aeromonas hydrophila / caviae uzro~nik bakteri-jemije koja je dovela do uginu}a riba.Tablica 2. Podaci o antibiogramuTable 2. Results of testing antimicrobial sensitivity.Antimikrobna tvar / AntimicrobialmatterOznaka / Sign Stupanj osjetljivosti / Degree ofsensibilityA. hydophila/caviaetype I type IIAmpicilin AM10 R RChloramphenicol C30 I SEnrofloxacin ENO5 S IErythromycin E15 I RFlumequin AR30 S SNitrofurantion F/M300 R RNorfloxacin NOR10 I INovobiocin NB5 I IOxytetracycline T30 I IPenicilin P10 R RPiperacilin PIP100 R RSulfametoxazole ++ trimethoprim SXT R STetracycline TE30 I ITrimethoprim TMP5 R IStupanj osjetljivosti: S — osjetljiv; I — srednje osjetljiv; R — neosjetljiv.Degree of sensibility: S — sensitive; I — indifferent; R — resistant.Ribarstvo, 62, 2004, (3), 95—102 D. Kapetanovi}, E. Teskered‘i}: Aeromonasna bakterijemija mla|i kalifornijske pastrve100Biokemijskom karakterizacijom uzro~nika identificirana su dva tipa Aero-monas hydrophila / caviae. Utvr|eno je postojanje razlike u posjedovanjuarginin–dihidrogenaze (ADH), kao i u sposobnosti fermentacije adipata (ADI).Na osnovi ispitivanja osjetljivosti prema antimikrobnim tvarima evidentnaje u tome smislu razlika izme|u dvaju izoliranih tipova A. hydrophila / caviae.Naju~inkovitija antimikrobna tvar protiv A. hydrophila / caviae tip I i tip IIbio je flumekvin.A. hydrophila caviae tip I pokazala je ve}i stupanj rezistencije na djelovanjeantimikrobnih tvari. U skladu s opisanim razlikama u biokemijskim svojstvimaizoliranih sojeva iz roda Aeromonas (ADH i ADI) i utvr|enim razlikama urezistenciji, na{i rezultati upu}uju na utjecaj ovih dvaju biokemijskih para-metara na rezistenciju.	AEROMONAS SPP BACTEREMIA OF RAINBOW TROUTFRY (ONCORHYNCHUS MYKISS): BIOCHEMICALCHARACTERIZATION OF THE CAUSATIVE ORGANISMAND ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBILITYD. Kapetanovi}, E. Teskered‘i}Aeromonas hydrophila and other members of Aeromonas genus are ubiquitusin aquatic environment and make part of normal bacterial flora of rainbowtrout. Aeromonas spp. infections are worldwide registered. Here we presentour experience and knowledge on Aeromonas bacteremia, which causes mor-tality of rainbow trout fry.Rainbow trout fry, 7 month old, started to die in November 2003. Fishsamples (17 samples) of dead and moribund fish were delivered to theLaboratory for aquaculture.With Api 20 NE tests Aeromonas hydrophila / caviae type I was identifiedwith an average probability of 99.9 % (one test against), as well as Aeromonashydrophila / caviae type II with an average probability of 99.5 % (one testagainst) from liver, spleen, kidney, intestines and damaged eye. All of isolatedand identified samples were tested for antibiotic susceptibility by disc diffusionmethod. The test showed that specimens were most sensitive on flumequin,Damir Kapetanovi}, dr. vet. med., dr. sc. Emin Teskered‘i}, senior scientist, Ru|erBo{kovi} Institute, Center for marine and environmental research, Laboratory foraquaculture, Bijeni~ka 54, 10000 Zagreb, Croatia, e–mail: kada@irb.hrRibarstvo, 62, 2004, (3), 95—102                D. Kapetanovi}, E. Teskered‘i}: Aeromonasna bakterijemija mla|i kalifornijske pastrve101  and relatively less sensitive on chloramphenicol and enrofloxacin. Therapy wassuccessfully applied with Flubactin®.Key words: rainbow trout, Aeromonas hydrophila / caviae.LITERATURAArena, M. E., Saguir, F. M., Manca de Nadra, M. C. (1999): Argininedihydrolase patway in Lactobacilus plantarum from orange. InternationalJournal of Food Microbiology, 47, 203–209.Austin, B., Austin, D. A. (1999): Bacterial fish pathogens: disease of farmedand wild fish. Springer–Praxis publishing. Third (revised) edition. Chich-ester, UK, 6 pp.Cipriano, R. C., Bullock, G. L., Pyle, S. W. (2001): Aeromonas Hydrophila andmotile aeromonad septicemias of fish. Fish disease keafket, 68.Janda, J. M. (1985): Biochemical and exoenzymatic properties of Aeromonasspecies. Diagnostic Microbiology and Infectious disease, 3, (3), 223–232.Kapetanovi}, D., Teskered‘i}, E. (2003): Bakterijska flora li~inki i mla|akalifornijske pastrve (Oncorhynchus mykiss). Ribarstvo, 61, (3), 103–119.Nagli}, T., Hajsig, D., Madi}, J., Pinter, Lj. (1992): Praktikum op}e mikrobi-ologije i imunologije, [kolska knjiga, Zagreb, p. 33–37.Shirai, H., Mizuguchi, K. (2003): Prediction of the structure and function ofAstA and AstB, the first two enzymes of the arginine succinyltransferasepathway of arginine catabolism. FEBS Letters, 555, 505–510.Thykaer, J., Chrstensen, B., Nielsen, J. (2002): Metabolic network analysis ofan Adipoyl–7–ADCA–producing strain of Penicillim chrysogenum: Educa-tion of Adipate degradation. Metabolic engineering, 4, (2), 151–158.Primljeno: 30. 6. 2004.Prihva}eno: 4. 10. 2004.Ribarstvo, 62, 2004, (3), 95—102 D. Kapetanovi}, E. Teskered‘i}: Aeromonasna bakterijemija mla|i kalifornijske pastrve102

AEROMONAS SPP BACTEREMIA OF RAINBOW TROUT FRY (ONCORHYNCHUS MYKISS): BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF THE CAUSATIVE ORGANISM AND ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBILITY

HRČAK - Portal of Croatian Scientific and Professional Journals

Aeromonas hydrophila and other members of Aeromonas genus are ubiquitus in aquatic environment and make part of normal bacterial flora of rainbow trout. Aeromonas spp. infections are worldwide registered. Here we present our experience and knowledge on Aeromonas bacteremia, which causes mortality of rainbow trout fry. Rainbow trout fry, 7 month old, started to die in November 2003. Fish samples (17 samples) of dead and moribund fish were delivered to the Laboratory for aquaculture. With Api 20 NE tests Aeromonas hydrophila / caviae type I was identified with an average probability of 99.9 % (one test against), as well as Aeromonas hydrophila / caviae type II with an average probability of 99.5 % (one test against) from liver, spleen, kidney, intestines and damaged eye. All of isolated and identified samples were tested for antibiotic susceptibility by disc diffusion method. The test showed that specimens were most sensitive on flumequin, and relatively less sensitive on chloramphenicol and enrofloxacin. Therapy was successfully applied with Flubactin®

Damir Kapetanović

Emin Teskeredžić

Directory of Open Access Journals

Croatian Journal of Fisheries

http://doaj.org/search?source=%7B%22query%22%3A%7B%22bool%22%3A%7B%22must%22%3A%5B%7B%22term%22%3A%7B%22id%22%3A%22293cafb809a542a4bb91395a69893295%22%7D%7D%5D%7D%7D%7D

AEROMONAS SPP BACTEREMIA OF RAINBOW TROUT FRY (ONCORHYNCHUS MYKISS): BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF THE CAUSATIVE ORGANISM AND ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBILITY

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Hrčak - Portal of scientific journals of Croatia

HRČAK - Portal of Croatian Scientific and Professional Journals

Directory of Open Access Journals