Bactérias do gênero Staphylococcus estão entre os principais agentes causadores da mastite ovina. Um dos maiores entraves ao tratamento dos animais doentes são cepas resistentes aos antimicrobianos empregados. A pesquisa do gene mecA nos estafilococos é um instrumento auxiliar para a determinação de aspectos epidemiológicos da doença. Este trabalho teve por objetivo investigar a resistência à oxacilina em estafilococos coagulase-negativos isolados no leite de ovelhas com mastite subclínica. Foram analisadas 448 amostras de leite de dois rebanhos. Os micro-organismos isolados foram submetidos previamente a testes de sensibilidade a antibióticos in vitro a partir da técnica de difusão em disco. Naqueles resistentes à oxacilina nestes testes efetuou-se a pesquisa do gene mecA, com a extração do DNA cromossômico por meio da técnica de extração fenol-clorofórmio. Os estafilococos coagulase-negativos apresentaram resistência à oxacilina e a presença do gene mecA foi detectada em quatro isolados, que também apresentaram características de multirresistência. Tais achados reforçam a importância deste grupo de micro-organismos na etiologia da mastite subclínica em ovinos e abre perspectivas para futuras pesquisas para a investigação da epidemiologia da doença