在台灣癌症是一項嚴重的疾病，而發展最低侵入式的技術來診斷膀胱癌是相當具有癌症診斷價值的。在這個研究中，我們利用非線性光學顯微術，對正常與癌症膀胱組織進行影像與分析。為了觀察癌症細胞早期的發展，我們也提出了皮膚固定裝置，以求在活體情況下擁有高解析度的觀察影像。
我們的結果顯示：結合二倍頻與雙光子自體螢光的影像，可以取得分子與結構的資訊，以區分膀胱癌和正常組織。藉由ASI(自體螢光對二倍頻的指數)，我們可得到定性與定量的資訊，用以區分正常與罹癌的膀胱組織。
運用自體螢光與二倍頻訊號的消長，我們也對在活體環境中扁平細胞與結締組織的交互作用有了一定的了解。Tumor is a major disease in Taiwan and the development of minimally invasive techniques to diagnose bladder tumor will be of tremendous values for cancer diagnosis. In this investigation, we used nonlinear optical microscopy to image and analyze normal and cancerous bladder tissues. In order to monitor the early development of cancer cells, we also implemented a skin-fold chamber system for high resolution observation in vivo.
Our results show that a combination of second harmonic generation and two-photon autofluorescence imaging can be used to acquire molecular and structural information in distinguishing bladder carcinoma from normal tissues. With the application of ASI ( Autofluorescence versus Second harmonic generation Index ), we can obtain the qualitative and quantitative information for distinguishing normal and cancerous bladder tissues.
Utilizing the variation of autofluorescence and second harmonic generation signal, we can also visualize the interaction between squamous cells and connective tissue in vivo.致謝 1
Abstract 4
摘要 5
目錄 6
圖目錄 8
表目錄 9
第一章 緒論
1.1 研究動機 10
1.2 非線性光學顯微術的發展與生醫應用 10
1.2.1 歷史回顧 10
1.2.2 生醫應用 11
第二章 實驗原理與儀器
2.1 非線性光學顯微術原理
2.1.1 雙光子螢光 16
2.1.2 二倍頻 18
2.1.3 顯微術原理 20
點擴函數、數值孔徑與解析度 22
2.2 實驗儀器架構 24
2.2.1 多光子顯微系統 24
雷射光源、光路元件、顯微系統、訊號接收 25
2.2.2 皮膚固定裝置 26
第三章 樣品與處理方法
3.1 實驗樣品選擇 29
3.1.1 膀胱 29
3.1.2 裸鼠 29
3.2 生物樣品構造 30
3.2.1 上皮、結締與肌肉組織 30
3.2.2 膀胱構造 31
3.2.3 皮膚構造 32
3.3 處理方法 33
3.3.1 膀胱樣品處理 33
3.3.2 裸鼠癌症模式 34
第四章 結果與討論
4.1 人類組織病變研究 36
4.1.1 正常與癌症配對組織影像 36
4.1.2 螢光與倍頻訊號分析與討論 40
4.2 裸鼠活體研究 44
4.2.1 活體細胞影像 44
4.2.2 光學訊號分析與討論 46
第五章 總結與展望 49
附錄：動物實驗許可證明 5
