Tozawa, Keiichi

トザワ, ケイイチ

戸澤, 圭一

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要 約 
報 告 番 号 氏 名 甲 乙 第     号 
（ 内容 の要 旨 ） 
主 論 文 題 名 
 血小板輸血製剤の臨床的需要は高まる一方であるが、その供給は善意のドナーに依存
し、また保存期間が短いことから不安定である。体外での巨核球・血小板大量産生の細
胞ソースとして、脂肪組織由来間葉系幹細胞株（adipose-derived mesenchymal stem cell 
line：ASCL）を作製した。ASCLは、ヒト脂肪組織から脂肪細胞を取り出し、upside-
down cultureと言う方法で脂肪細胞を脱分化させることで得られた。ASCLの特性解析を
行 っ た。ASCLは、培 養 容 器 へ 接 着 し、CD73・CD90・CD105陽 性、CD45・CD34・
CD14・CD11b・CD19・HLA-DR陰性であり、骨芽細胞・成熟脂肪細胞・軟骨細胞への分
化能を有し、国際細胞治療学会の提唱する間葉系幹細胞の基準に合致した。ASCLは複数
株で2ヶ月以上に渡って安定した増殖能を示し、また染色体検査では正常核型であった。
ASCLの巨核球への分化能について解析を行った。ASCLをトロンボポエチンを含まない
巨核球分化誘導培地で培養すると、巨核球系に特有のCD41陽性・CD42b陽性の大型細胞
が得られ、またCD41陽性細胞の割合は8日目が最大であった（63.2±1.0%）。得られた細
胞は、巨核球系の特徴である多倍体化を示し、CD41陽性細胞で8N以上の細胞群を認め
た。電子顕微鏡では、巨核球に特徴的な顆粒やdemarcation membrane systemを有するこ
とが確認された。免疫染色では、serotonin、VWF、PF4などの巨核球関連物質を細胞内に
有することが確認された。次に、ASCL由来巨核球から産生された血小板について解析を
行った。ASCL由来巨核球を巨核球誘導培地で培養を続けると、ASCL培養開始12日目を
最大として、血小板が得られた。得られた血小板は、CD42b陽性かつ間葉系幹細胞の表
面抗原で細胞接着に関連するCD90も陽性であった。ASCL由来血小板について、ヒト末
梢血から採取された血小板と比較した機能解析を行った。凝集計を用いた解析では、
ASCL由来血小板・ヒト末梢血血小板ともに自然凝集を認めず、コラーゲン等の刺激によ
り凝集を認めた。血小板減少状態とした免疫抑制NSGマウスに対して、ASCL由来血小板
およびヒト末梢血血小板を輸注し、in vivoでの血中残存率を比較した。どちらも30分時
点でマウス血中の血小板数はピークとなり、似た残存率変化を示した。血栓形成能解析
システムT-TASを用いた解析で、ASCL由来血小板は血流下で血栓形成能を持つことが示
された。脂肪組織をもとに作成されるASCLは作製が容易で大量培養が可能であり、また
機能を持った血小板を産生できることが示された。体外での血小板産生の細胞ソースと
して有用な選択肢になると考えられた。  
戸 澤 圭 一 
Unique megakaryocytes and platelets from novel human adipose-derived mesenchymal stem 
cell line 
（ヒト脂肪組織由来間葉系幹細胞株からの巨核球及び血小板産生） 


Hito shibō soshiki yurai kanyōkei kansaibōkabu kara no kyokakukyū oyobi kesshōban sansei

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Hito shibō soshiki yurai kanyōkei kansaibōkabu kara no kyokakukyū oyobi kesshōban sansei

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