Maytenus ilicifolia é um arbusto de ocorrência natural da Floresta Ombrófila Mista (Floresta com Araucária). Esta espécie tem uso popular em comunidades tradicionais e povos indígenas no Brasil. A fragmentação da Floresta com Araucária, nas últimas décadas, juntamente com a comprovação terapêutica em males gástricos e o uso em larga escala, causaram grande devastação de populações naturais de Maytenus ilicifolia, resultando na perda do complexo genético deste recurso medicinal. Há necessidade urgente de estudos para elaborar estratégias de conservação genética e domesticação deste germoplasma. O objetivo deste estudo foi determinar a variabilidade genética em populações naturais de Maytenus ilicifolia por meio da análise do polimorfismo de DNA utilizando marcadores RAPD. Três populações foram estudadas, uma no município da Lapa e duas na região de Guarapuava. Estas áreas são distintas, tanto geologicamente quanto em relação a paisagem. Selecionou-se sete primers RAPD, os quais produziram 52 bandas em Maytenus ilicifolia, sendo 44 polimórficas. A análise da distância genética foi realizada pelo agrupamento das amostras segundo os princípios da taxonomia numérica, utilizando-se o coeficiente de similaridade de Jaccard. A partir das distâncias genéticas, montou-se um dendrograma, o qual separou o material estudado em quatro grupos distintos, dois para a região da Lapa e dois para Guarapuava. Os grupamentos formados estão arranjados de acordo com as características geológicas e classes de solos em que os indivíduos se encontram. A variabilidade genética das populações de Guarapuava, quando comparada a da Lapa, apresentou uma maior similaridade entre os grupos formados. Estratégias para conservação genética em Maytenus ilicifolia devem ser estruturadas de acordo com os parâmetros ecogeográficos locais, realizando a coleta em cada um dos compartimentos ambientais em que os indivíduos se encontra