Ansatz zur Etablierung von konditional/reversiblen knock-out Mäusen für das zellspezifische T-Zell Onkogen SCL

Abstract

Ziel der vorliegenden Arbeit war es, ein innovatives System zur Herstellung einer konditional/reversiblen SCL-knock-out Maus zu etablieren. Es wurde deshalb ein neuer knock-in/knock-out Ansatz mit Hilfe des Tet-Systems gewählt. Im Rahmen dieser Arbeit war es möglich für die Generierung der konditionalen SCL-knock-out Maus essentielle Effektor- und Respondermauslinien zu etablieren und zu charakterisieren. Durch knock-in der rtTA-cDNA in den SCL-Lokus wurde eine Effektormauslinie hergestellt, welche in allen untersuchten hämatopoietischen Geweben rtTA exprimierte.Die zur Generierung der SCL-knock-out Maus notwendigen transgenen Responderlinien wurden ebenfalls generiert. Diese Linien wurden in einem Funktionsassay auf ihre Regulierbarkeit rekombinanter SCL-Expression untersucht. Dabei wurde eine Linie identifiziert, welche stringent/exogen regulierbar war.Effektor- und Responderlinie konnten etabliert und durch adäquate Kreuzung eine heterozygote Effektor/Responderlinie generiert werden. Die Rückkreuzung dieser Linie bei gleichzeitiger Gabe von DOX sollte in der konditionalen/reversiblen SCL-knock-out Maus resultieren. Bei Ende dieser Arbeit wurde allerdings in keinem Fall ein Rescue des letalen SCL Nullhintergrunds durch die rtTA-vermittelte rekombinante SCL-Expression beobachtet. Die in dieser Arbeit bereits hergestellten und verbesserten neuen Effektorkonstrukte sowie das Zurückgreifen auf alle vorhandenen SCL- Respondermäuse können in Zukunft zur erfolgreichen Etablierung eines exogen regulierbaren konditional/reversiblen SCL knock-out führen.The aim of this work was to establish, for the first time, conditional/reversible knock-out mice for the hematopoietic transcription factor SCL. As the ablation of SCL leads to an embryonic lethal phenotype, a new strategy using the Tet-System was applied and evaluated. Using a knock-in approach, rtTA was put under the control of SCL regulatory elements (effector). Subsequently, appropriate expression of rtTA was confirmed in spleen and peripheral blood. In addition, ten transgenic responder lines were generated carrying the SCL cDNA under the control of a tet-inducible minimal promoter (responder). All transgenic responder lines were monitored for their ability to express SCL in a tet-dependent fashion. In these experiments one line exhibited stringent controlled regulation of tet-inducible SCL. Both mouse lines were used to generate heterozygote effector/responder offspring. It was expected that adequate backcrossing would result in a conditional/reversible SCL knock-out phenotype. However, in these crosses no rescue of the lethal SCL null phenotype was observed. The novel engineered effector constructs presented in this work together with the existing responder lines may lead to the establishment of exogenously inducible and also reversible SCL null mice