学位の種別: 課程博士審査委員会委員 : （主査）東京大学教授 小澤 敬也, 東京大学教授 俣野 哲朗, 東京大学准教授 池田 均, 東京大学准教授 山内 敏正, 東京大学講師 奥川 周University of Tokyo(東京大学

OKAME MICHIO

大亀 路生

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〔課程―２〕	 
審査の結果の要旨 
 
氏名	 大亀	 路生 
 
	 本研究は、患者由来のHIVの準種（個体内で様々な変異を持ったウイルスの集まり）の副受容体
使用を詳細に見るための方法として96検体の副受容体使用を一度に決定するHigh throughput 
cell-fusion assayを作製し、臨床検体に用いてクローン解析しHIVの副受容体使用の特徴を明らかにす
ることを試みた。さらに、R5ウイルスからR5/X4 ウイルスの副受容体使用の変化に関与する領域を
同定することを試みたものであり、下記の結果を得ている。  
１．	 ヒトグリオーマ由来細胞株にCD4受容体、CCR5副受容体またはCXCR4副受容体、DSP1-7の3者
を発現させたものをレセプター発現細胞として、ヒト胎児腎臓細胞株に患者由来のHIVのエン
ベロープ（Env）とDSP8-11を発現させたものをEnvタンパク質発現細胞としてそれぞれ準備し、
それぞれのレセプター発現細胞との細胞融合が起きるかを見ることで副受容体使用を決定する
Cell-fusion assayを形質転換後から96wellプレートで行うHigh throughput cell-fusion assayを作製
し、96検体の副受容体使用を一度に決定することを可能にした。 
２．	 副受容体の使用がR5ウイルスからDM（R5/4ウイルスまたはR5ウイルス、X4ウイルス、R5/X4
ウイルスがMIXの状態）ウイルスに変化した8名の初診後早期と経過観察後の検体それぞれ合わ
せて16検体をクローン解析し、Bulk（ウイルスが混在した状態）でR5ウイルスからDMウイル
スへ副受容体使用が変化することで、R5/X4ウイルスクローンの割合とN4X4細胞のルシフェラ
ーゼ活性（RLU）が上昇することを示した。 
３．	 N4X4 細胞にさまざまな RLU を示した R5/X4 ウイルスクローンを用いて検出限界をみたところ、
N4X4 細胞の RLU が高いほど R5/X4 ウイルスクローンは少ない割合で検出可能で、10000 RLU
以上の R5/X4 ウイルスクローンは 20％存在すれば検出可能であることを示した。また、クロー
ンの N4X4 細胞の RLU と遺伝子型副受容体決定法の Geno2pheno の False positive rate（FPR）と
の相関をみたところ、N4X4 細胞の RLU が高いほど Geno2pheno の FPR が低く、FPR が 20%の
マイナーヴァリアントが存在する場合でもBulkで検出可能でDMウイルスと判定することを示
した。 
 
４．	 初診後早期 40 名の臨床検体の副受容体使用を cell-fusion assay で判定し、DM ウイルスと判定
された患者は R5 ウイルスと判定された患者よりも CD4 陽性細胞数の減少が早く、マイナーヴ
ァリアントの存在と、CD4 陽性細胞数の減少速度が相関することを示した。 
 
５．	 同じ Env V3 のアミノ酸配列を持つもので副受容体使用が異なるクローンの Env 全長を解析し、
副受容体使用の変化に関与する可能性のある C1 領域の 51 番目のアミノ酸に点変異（Asn→Lys）
を加えた結果、R5 ウイルスクローンが R5/X4 ウイルスクローンに変化し、R5 ウイルスと R5/X4
ウイルスの副受容体使用の違いが Env V3 領域だけでなく C1 領域の違いが関与することを示し
た 
 
 
	 以上、本論文は High throughput cell-fusion assay を作製し、96 検体の副受容体使用を一度に決定す
ることを可能にし、臨床検体に用いて DM ウイルスと判定された患者は R5 ウイルスと判定された
患者よりも CD4 陽性細胞数の減少が早いことを明らかにした。また、R5 ウイルスと R5/X4 ウイル
スの副受容体使用の違いが Env V3 領域だけでなく、C1 領域の違いが関与することを示した。本研
究は副受容体使用決定法を作製しその有用性を示し、Env をもつウイルスの細胞膜融合などの研究
にも貢献が可能であり、また、HIV の副受容体使用に新知見を提唱したことにより、学位の授与に
値するものと考えられる。 
 
	   
 


臨床検体を用いたHIV副受容体の使い分けとその変化に関する研究

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臨床検体を用いたHIV副受容体の使い分けとその変化に関する研究

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