Comparison of mechanical, enzymatic and mechanical-enzymatic dissagregation tecniques in extraction of lymphocytary populations and macrophagues in tissues with chronic advanced periodontitis

Abstract

ANTECEDENTES: En este estudio se compararon tres técnicas de disgregación en la recuperación de poblaciones linfocitarias y macrófagos en tejidos con periodontitis crónica avanzada. OBJETIVO: comparar, por citometría de flujo, el recuento de poblaciones linfocitarias y macrófagos de biopsias de tejidos periodontalmente afectados, con tres procesos previos de disgregación celular (mecánica, enzimática con colagenasa y mecano-enzimática) para observar cuál de éstos es más efectivo en la recuperación celular y produce menos alteraciones en los marcadores de superficie. MÉTODOS: Se realizó un estudio descriptivo comparativo donde se eligió una muestra de 11 biopsias de tejidos con periodontitis crónica avanzada. El procedimiento consistió en tomar las biopsias por medio de biseles internos que se colocaban en un Eppendorf con el medio de transporte. En el grupo 1 se realizó la técnica de disgregación mecánica Medimachine®, en el grupo 2 técnica enzimática (colagenasa 2%), y el en grupo 3 técnica mecano-enzimática (Medimachine® y colagenasa 2%). Posteriormente las muestras fueron analizadas por un citómetro de flujo FACS- Aria (Becton Dickinson San José California). RESULTADOS: No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre las tres técnicas de disgregación en la recuperación de poblaciones linfocitarias; sin embargo, hubo una mayor recuperación de macrófagos con la técnica mecano-enzimática comparada con la mecánica, siendo estas diferencias estadísticamente significativas. CONCLUSIONES: Las tres técnicas estudiadas presentaron resultados comparables en cuanto a recuperación y daño a los marcadores de superficie, por lo cual, por tiempo y costo, se aconseja realizar una técnica mecánica con Medimachine®.BACKGROUND: Three disaggregation techniques for the recovery of lymphocyte and macrophage populations from tissues with advanced chronic periodontitis were analyzed. OBJECTIVE: Compare by flow cytometry the recovery of lymphocyte and macrophage populations from biopsies of periodontal tissues with periodontitis by using three processes of cellular disaggregration (mechanical, enzymatic with colagenase and mechanical-enzymatic) to observe which of these is more effective and produces fewer alterations in the surface markers. METHODS: A comparative descriptive study was carried out with a sample of 11 biopsies of tissues taken from 23sites with advanced chronic periodontitis. The procedure consisted of taking the biopsies by means of internal bevels and placing them in an Eppendorf for transportation. In group 1, the mechanical technique of disaggregation (Medimachine®) was carried out. In group 2, the enzymatic technique (colagenase 2%) was used. In group 3, the mechanical-enzymatic technique (Medimachine® and colagenase 2%) was perfomred. Later on, the samples were analyzed with a FACS-Aria cytometer (Becton Dickinson San José California). RESULTS: There were not statistically significant differences among the three disaggregation techniques for the recovery of lymphocyte populations. However, there was a bigger recovery of macrophages with the mechanical-enzymatic technique when compared to the other two techniques, being statistically significant. CONCLUSIONS: The three techniques studied produce similar results in the recovery and damage to the surface markers; hence, considering time and cost constrains, it is advisable to carry out the mechanical technique with Medimachine®