取得学位 : 博士（医学）, 学位授与番号 : 医博甲第1076号, 学位授与年月日：平成5年3月25日,学位授与年：199

Nakamoto, Yasunari

中本 安成

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学位授与番号学位授与年月日氏名学位論文題目医博甲第1076号平成５年３月25日中本安成ｃ型肝炎ウイルスにおける表面抗原検出系の確立一高変異領域の関与について－論文審査委員 主査副査教授教授教授小原松Ｉ健文綱林田島Ｉ夫治内容の要旨および審査の結果の要旨近年，各種肝障害の主たる原因のひとつがＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）であることが示された。ＨＣＶゲノムの表面抗原領域Ｅ２／ＮＳ１には２つの高変異領域（ＨＶＲ１，ＨＶＲ２）が存在し，Ｃ型肝炎の慢性化と深く関わっている可能性が示唆されているが，詳細については未だ不明である。そこで，この高変異領域の免疫系における役割および臨床的意義を検討するため，高変異領域を含む５種類のＨＣＶゲノムを分子生物学的に発現させ，これらに対するポリクローナル抗体を作成した。これらを用いて，交差反応性について検討し，高変異領域の抗原性について解析した。さらに，ウエスタンプロッテイング法による肝組織中Ｅ２／ＮＳ１タンパク検出系を確立し，その抗原性についても検討した。Ｃ型慢性肝疾患患者検体より得られた５種類のHCVｃＤＮＡを，大腸菌内にて，グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパクとして発現させた。これらに対するポリクローナル抗体を作成し，ウエスタンプロッティング法にて検討すると，検出限界は10,9であった。作成した５種類の組み換えタンパク及び抗体の交差反応の結果，それぞれの抗体の反応性の違いが見出され，反応親和性に直接影響したと考えられるアミノ酸部位を検討すると，１４箇所認められ，そのうち１０箇所が高変異領域ＨＶＲ１に集中していた。また，Ｅ２／ＮＳ１タンパクについての検討では，Ｃ型慢性肝炎症例の肝組織中，４４kDaの特異反応性タンパクを認め，ＨＣＶゲノムＥ２／ＮＳ１部位由来の発現タンパクであることが推定された。このタンパクに対する反応性についても５種類の抗体間で相違が認められた。以上の結果から，ＨＣＶゲノムＥ２／ＮＳ１部位の抗原性の違いには，ＨＶＲ１領域の多様性が強く影響しており，肝組織中Ｅ２／ＮＳ１タンパクについても高変異領域依存性の免疫学的多様性を示すことが明らかとなった。これより，ウイルス表面タンパクにおける高変異配列が，免疫系のターゲット抗原として多様性を示し，感染の慢性化過程に強く関与する免疫サーベイランスからのエスケープ現象と深く関連することが示唆された。本研究は，ＨＣＶゲノム表面抗原領域に存在する高変異領域の多様性が，Ｃ型肝炎の慢性化の機構を考える上で重要であることを示した点で意義深い論文と考えられる。－２５－

C型肝炎ウイルスにおける表面抗原検出系の確立: 高変異領域の関与について

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C型肝炎ウイルスにおける表面抗原検出系の確立: 高変異領域の関与について

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