取得学位 : 博士（医学）, 学位授与番号 : 医博甲第1579号, 学位授与年月日 : 平成15年3月25日, 学位授与大学 : 金沢大

Kumano, Tomoyasu

熊野 智康

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甲第1579号平成15年３月25日熊野智康ニワトリDT40細胞を用いたチェックポイント関連遺伝子Rad9の放射線感受性に関する検討学位授与番号学位授与年月日氏名学位論文題目松井修利波紀久山本博教授教授教授論文審査委員 主査副査内容の要旨及び審査の結果の要旨細胞に1轡!#放射線を照射すると細I調期が￣踊りに停止する現象力俔られ､近年では細胞周期チェックポイントという概念にて説明される。分裂酵園こて発見された放射線惑受性に関連するＲａｄ遺伝子の一部は、このチェックポイントに関与すること力尿されている。最近、これらの遺伝子に対して相同住を有するi國云子がヒトを含む高雪動物にて同定されてきたかくまだその機能に関してはよく分かっていない。本研究ではRad遺伝子の一つであるRad9に関し、遺伝F子ノックアウトを行うことで放射線悪受注や細i包冒１期チェックポイントヘの関連について検討した｡研究材料としてはニワトリＢリンパ球由来の細胞株で、高頻度に標的組み換えjb樋こるDT40細胞を用いた。ニワトリのRad9を同定後､エクソンの一部を蘂斉１１耐性遺伝子にて置換して作成されたターゲッティングベクターをDT40細胞内に導入し、Rad9のノックアウト細胞(Rad9-/-細胞)を作成した。コロニヨ杉虚去にてＸ線感受性を検酎したところ、Rad9-/-細胞は野生型に比べ高感受性を示し、Rad9は高禦kh物細胞においても電離ii射總惑受性に関与すること力編されたｓしかし､電離放射線に対する高感受性やチェックポイントの異常を示すことが明らかとなっているATM(AtaxiaTeIangiectasiaM｣tated）のノックアウト細胞(ATM/-細胞）と比べると感受性は低く、RacBのi電離h立身d籍憾受性への関与はATMに比べると少ないこと力尿された。一方、Rac9-/-細胞は紫外線やヒドロキシ尿素に対しても野生型に比べ高感受性を示しﾌﾟﾐｺｳ<､電離放射線の場合に比べその変化が著明であり、高等動物においてＲａｃＤは紫外線やヒドロキシ尿素に対する感受性により強く関与する可能働埼酸された。さらに、Ｘ線照射による細胞周期のＭ期への進展j[DHiljに関して検討したところ、野生型ではＸ線照射後２時間まで分裂期の細胞はほとんど贈りi肋俔られなかったのに対し、Rad9-/‐細胞ではATM‐/-細胞と同程度に分裂期の細胞の増加を認め、電離hh射線によるＭ期への進展抑Hillに異常力俔られた.この結果から、高事nt物細胞においてもRad9は電離ﾜML射線による細胞周期チェックポイント欄著に関与していることが示されたe以上のように、本研究ではＲａｄ９が高等動物細胞においても電離放射線、紫外線、ヒドロキシ尿素に対する感受Ｍ２やチェックポイントの両者に関して重要な役割を果たすことを示した。放射線生物学において注目されているチェックポイントに関して遺伝子レベルでの知見を深めた研究であり、学位論文に(直するものと:平価された。－４０－

ニワトリDT40細胞を用いたチェックポイント関連遺伝子Rad9の放射線感受性に関する検討

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