取得学位：博士(医学), 学位授与番号：医博甲第1471号, 学位授与年月日：平成13年3月31日,学位授与年：200

Saito, Takahito

齋藤 孝仁

Kanazawa University Repository for Academic Resources

学位授与番号学位授与年月日氏名学位論文題目医博甲第1471号平成13年３月31日齋藤孝仁ラクタシスチンによるマウス培養肝内胆管上皮のアポトーシス誘導一原発性胆汁性肝硬変での胆管アポトーシスとの比較を中心に－論文審査委員 主査副査教授教授教授林健一田貴司渕宏小須馬内容の要旨及び審査の結果の要旨原発性胆汁性肝硬変（primarybiliarycirrhosis,PBC）は、中年以降の女性に好発する自己免疫性疾患で、小葉間胆管の進行性破壊が特徴である。この胆管破壊のエフェクター機序としてアポトーシスが重要と考えられ、Fas/Fasリガンド『as-L)系が注目されている。最近、PBCの胆管上皮のアポトーシス発生における核因子カッパＢ（nuclearfactorkappaB,NF1cB）の役割やインターロイキンー１β（interleukm-1β，Ｌ１β）などの炎症性サイトカインの関与が注目されている。今回、PBCの胆管上皮アポトーシス機構の一端を明らかにする目的で、マウス肝内胆管上皮細胞を培養し、NF1cB阻害剤であるラクタシスチンによるアポトーシス誘導およびこれに伴うアポトーシス関連蛋白およびmRNAの発現を免疫組織化学法（EnVision法）とRT-PCR法により検討し、さらにPBCの肝内小葉間胆管でのＮＦにＢおよびその他のアポトーシス関連蛋白の発現を検討した。なお、胆管上皮細胞のアポトーシスはsinglestrandedDNAの免疫染色で検討し、アポトーシス指数（％）で評価した。まず、BALＭマウスおよび機能的Fas発現欠損C3H/lprマウスの胆管上皮細胞株を作製し、コラーゲンゲル上の単層培養を行い、以下の実験に用いた。ラクタシスチンを培地に段階的濃度叩、Cl/L～10匹、Cl/Lで添加した。その結果、６～12時間で、ＢALB/bマウス胆管上皮にアポトーシスに関連する形態変化がみられ、アポトーシス指数が上昇した（最大16.4％）。また、これに関連して培養胆管上皮でのFas-LおよびFasの発現が冗進し、Ⅱ-1βのmRNA発現が低下した。一方、C3HHprマウスでは、これらの変化はみられなかった。Fas/Fas-Lの関与が重要と考えられた。次に、ＰＢＣ18例、肝外閉塞`性黄疸6例、組織学的正常肝19例、Ｃ型`慢性ウイルス性肝炎（chronicviralhepatitisC,ＣＶＨＣ）１５例のホルマリン固定パラフィン包埋切片を用い、免疫組織化学的検討を行った。ＰＢＣの胆管上皮細胞では、Fas、Fas-Lの発現冗進がみられ、ＮＦｌｃＢ、Ⅱ-1βの発現低下を認めた。以上、マウス培養肝内胆管上皮でのNFIcB減少状態およびＬ１βなどが、Fas/Fas-L系を介したアポトーシスの発生に関係すること、そしてこの機序がPBCの胆管障害でも作動している可能性が示唆された。本研究は、代表的な肝の自己免疫性疾患であるPBCの胆管破壊のプロセスを、ヒト材料と胆管上皮培養系を用いて比較検討し、Fas/Fas-L系とこれに関わる転写因子や炎症性サイトカインがアポトーシス発生に重要な系であることを明らかにしたものであり、臨床肝臓病学に寄与する労作と評価された。－４５－

ラクタシスチンによるマウス培養肝内胆管上皮のアポトーシス誘導 : 原発性胆汁性肝硬変での胆管アポトーシスとの比較を中心に

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