取得学位 : 博士（医学）, 学位授与番号 : 医博甲第1634号, 学位授与年月日 : 平成16年6月30日, 学位授与大学 : 金沢大

Wang Yetao

王, 冶陶

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学位授与番号学位授与年月日氏名学位論文題目甲第１６３４号平成１６年６月３０日王冶陶ＰＹＮＯＤ,aNovelApafl/CED41ikeProteinisanInhibitorofASCandCaspase-1(新規ApafLl様遺伝子ＰＹＮＯＤのクローニングと機能解析）論文審査委員主査副査教授教授教授向田直史山本博山本健一内容の要旨及び審査の結果の要旨ヒトゲノム配列との相同配列解析から､アポトーシス誘導性細胞内因子Apaf-1と類似の蛋白をコードする遺伝子が多数発見されている。このファミリーに属するNOD1やNOD2は自然免疫系の病原体認識の一端を担う細胞内受容体であり、CARD12やPYPAF1，５，７はASCと呼ばれる分子を介してアポトーシスを誘導し、NF-KBや１Ｍβを活性化することから、このファミリーに属する分子は自然免疫系の活性化に係わる可能性が高い。さらに、ＮＯＤ２やPYPAF1/cryopyrinの機能冗進型突然変異は、それぞれB1ausyndromeおよびcold-inducedautoinflanunatorysyndromeという遺伝性炎症性疾患の原因となる。また､NOD2の機能低下型変異はCrohn病の素因となる。ヒトゲノムデータベースの解析から新しいApaH様分子、PYNODの遺伝子を発見し、様々な組織・細胞におけるPYNODの発現を検討ｵｰるとともに、PYNOD遺伝子をHEK293細胞に一過性に発現させ、その機能を検討し、以下の結果を得た。1．ヒトPYNODmRNAは種々の組織に広汎に発現し､脳、心臓､骨格筋で高い発現を示した。また､RT-PCR法で解析したところ、調べた全ての細胞株にPYNODmRNAの発現が認められた。2．CARD12やPYPAF1、５，７はASCを介してアポトーシスとＮF引くBの活性化を誘導したが、PYNODは逆にこれらの反応を抑制した。デス因子受容体Fasやアポトーシス誘導性Bcl-2ファミリー分子であるＢｉｄの一過性発現によるアポトーシスは阻害しなかった。また、肥KKやMyD88、TNF-qによるNF-KBの活|生化は抑制しなかった｡これらの結果からPYNODはASCによるアポトーシスとNF-KB活性化を選択的に阻害することが明らかになった。3．CARD12は直j妾、またPYPAF1、５，７はASCを介してCasPase-1を活Ⅲ生化し、IL-1pの活性化を誘導したが、PYNODは逆にCaspase-1によるIL-113の分泌を抑制した。4．PYNODと様々な分子を刑293T細胞に一過性に発現させ、免疫沈降-ウエスタンブロテイング法で分子間相互作用を検討したところ、PYNODは自己多量体化ずること、ASC、Caspase-1、IL-16と会合することが判明した。一方、RIP、ＴＲⅢ、１KKV、Ｂｉｄとの結合は検出されなかった。これらの結果から、PYNODはASCやCaspase-1の活性を抑制し、アポトーシスおよび炎症反応のシグナル伝達を抑制する細胞内因子であることが示唆された。以上、本研究は炎症・免疫応答の制御機構の一端の解明とともに、多くの遺伝性炎症性疾患とも関連するApaf-1様分子群の制御法開発にも寄与しうる、価値ある研究と評価された。－１－

新規Apaf-1様遺伝子PYNODのクローニングと機能解析

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新規Apaf-1様遺伝子PYNODのクローニングと機能解析

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