取得学位 : 博士（医学）, 学位授与番号 : 医博甲第1417号，学位授与年月日：平成12年3月31日,学位授与年：200

Shimizu, Miho

清水 美保

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医博甲第1417号平成12年３月31日清水美保ラット糖尿病性腎症モデルにおけるマトリックスメタロプロテアーゼー２および膜型マトリックスメタロプロテアーゼー１の発現学位授与番号学位授与年月日氏名学位論文題目教授教授教授小林健馬渕佐藤論文審査委員 主査副査宏博内容の要旨及び審査の結果の要旨マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）－２は糸球体においては主としてメサンギウム細胞から分泌され，膜型ＭＭＰ（ＭＴ－ＭＭＰ）により活性化されることが近年明らかとなった。このＭＭＰ-2,MT1-MMPならびにＭＭＰ阻害因子（TIMP）の糸球体細胞外基質（ECM）代謝における役割は未だ十分には解明されていない。本研究では糖尿病性腎症のびまん性病変と結節性病変の形成過程におけるＭＭＰ－２とＭＴ１ＭＭＰの糸球体における発現と活性化を検討した。研究方法：自然発症インスリン非依存型糖尿病モデルであるOLETFラットとLETＯラットに，モノクロタリン(MCT）３０mg／kgおよび同量の生理食塩水を36週齢より４週毎に３回投与し，５０週齢まで観察した。尿アルブミンはELISA法にて測定した。光顕観察にてメサンギウム基質の増加を半定量化し，ＭＭＰ-2,ＭＴ１－ＭＭＰ蛋白の局在を免疫染色にて検討した。さらにＭＭＰの産生量を単離糸球体培養上清を用いたザイモグラムにて評価し，加えてＭＭＰ活性の局在を組織内酵素活性検出法にて検討した。また単離糸球体より全ＲＮＡを抽出し，ＭＭＰ-2,MT1-MMP，TIMP-2，ファイブロネクチンの遺伝子発現を逆転写一ＰＣＲ法にて検討した。研究成績：１）OLETFラットでは尿アルブミンの増加を認めた。２）OLETFラットではメサンギウム基質が増加し，ＭＣＴ投与によりメサンギウム融解，糸球体係蹄内皮細胞の腫大，結節類似病変を認めた。３）ＭＭＰ-2,ＭＴｌ－ＭＭＰ蛋白はメサンギウム基質増生部のメサンギウム細胞を中心に発現し，ＭＣＴ投与によりこれらはさらに増加した。４）糸球体培養上清中に活性型ＭＭＰ－２である62kDaの酵素活性を認め，ＭＣＴ投与によりこれはさらに増加した。組織上ではＭＣＴ投与OLETFラットのメサンギウム領域にＭＭＰ活性を認めた。５）糸球体でのＭＭＰ-2,MT1-MMP，TIMP-2，ファイブロネクチンの遺伝子発現も増加し，ＭＣＴ投与によりこれらはさらに増加したが，なかでもＭＭＰ－２発現がより冗進していた。以上の成績よりＭＭＰ-2,ＭＴ１－ＭＭＰは糖尿病性腎症のびまん性病変と結節性病変の形成過程で糸球体において産生，活性化されており，糸球体ＥＣＭの修復への関与が示唆された。これらの知見は進行性腎障害における糸球体硬化の進展機序を考えるうえで重要な基礎的観察であり，腎臓病学に資するところが大きいものと評価された。－４５－

ラット糖尿病性腎症モデルにおけるマトリックスメタロプロテアーゼ-2および膜型マトリックスメタロプロテアーゼ-1の発現

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ラット糖尿病性腎症モデルにおけるマトリックスメタロプロテアーゼ-2および膜型マトリックスメタロプロテアーゼ-1の発現

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