取得学位 : 博士（医学）, 学位授与番号 : 医博甲第1538号, 学位授与年月日 : 平成14年6月30日, 学位授与大学 : 金沢大

Sugimoto Hisashi

杉本, 寿史

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学位授与番号学位授与年月日氏名学位論文題目甲第1538号平成14年６月30日杉本寿史DifferentialRecognitionofTyrosine-basedBasolateralSignalsbyAP-1BSubunitノリlBinPolarizedEpithelialCells(上皮特異的に発現する蛋白輸送因子/、Ｂによるパソラテラルシグナルの認識機構）論文審査委員 主査副査教授教授教授佐藤山本福田龍博博内容の要旨及び審査の結果の要旨上皮細胞は1鍾性を持ち、その細胞膜は密着斑により頂端面と側底面に分けられる。新たに合成される膜蛋白質はトランスゴルジ網から小胞輸送により選択的にそれぞれの膜領域へと運ばれていく。､側底面への選別輸送に関与するｕＢはＡＰ１複合体凹鎖のホモログであり、上皮細胞特異的に発現する。似1Ｂとチロシンシグナルとの結合が側底面への選別輸送にどのように関与するかを解明するために、チロシンシグナルと結合しない皿Ｂ変異体を作成し、皿Ｂ発現のないブタ近位尿細管上皮細胞株ILC卍Ｋ１に発現させ（変異皿Ｂ発現細胞)、野生型１１Ｂ発現細胞株（野生型ｕＢ発現細胞)、皿Ｂ発現のない親株ILcPK1（JulB細胞）と比較検討した。得られた結果は以下のように要約される。1．チロシンシグナルの認識に重要と考えられるＦ１ね,D174bW408,剛１０をアラニンに置換した“1Ｂ変異体を作成し、この皿Ｂ変異体がチロシンシグナルと結合できないことをyeast2hybIid法にて確認した。2．変異１１Ｂ細胞においてｗｕｌＢ変異体が野生型ｕＢ同様ＡＰ１複合体に組み込まれることを免疫沈降法にて確認した。またgelmmdon法により、必1Ｂ変異体力地のＡＰ複合体に組み込まれないことを証明した。3．チロシンシグナルにより側底面へと輸送されることが知られているアシアロ糖蛋白受容体Ｈ１鎖（AGPRm）を免疫染色法にて解析したところ、１１Ｂ細胞、変異必１Ｂ発現細胞においては頂端面、側底面の両方に発現が見られたのに対し、野生型瓜Ｂ発現細胞ではほとんどが側底面に見られた。また、Ｈ１のチロシンシグナルYQDLのチロシンをアラニンに置換した変異蛋白質を野生型発現凪Ｂ細胞に発現させると、やはり頂端面、側底面の両方に発現することを確認した。同じくチロシンシグナルにより側底面へ輸送されるThchmp1キメラ蛋白質でも同様の結果を得た。両者においては似1Ｂの特定のアミノ酸によるチロシンシグナルの認識か【側底面への選別輸送の分子機序であることを明らかにした。４チロシンシグナルとは異なるタイプの側底面輸送シグナルを持つ低密度リポ蛋白質（LDL）受容体およびトランスフェリン受容体についても上記と同様の解析を行った。その結果、似１Ｂ細胞では頂端面、側底面の両方に発現が見られたのに対し、野生型叫Ｂ発現細胞、変異必１Ｂ発現細胞ではほとんどが側底面に発現していた。両者は座ｌＢのチロシンシグナル認識部位は重要ではないことが示唆された。5．野生型以ｌＢはILCHn細胞による上皮細胞に特徴的な単層構造の形成にも重要であることがわかっている。ＩＬＣＨｎによる単層構造は、我々の作成した変異必ｌＢの存在下でも形成されることがわかった。また､ｌｌＢによる上皮細胞の単層構造の形成維持も同様にチロシンシグナル結合活性とは異なる“１Ｂの機能を必要とすることが示唆された。本研究は上皮特異的に発現するｕＢの、側底面への選別輸送に関わる機序を明らかにしたものであり、学位授与に値すると評価された。－１－

上皮特異的に発現する蛋白輸送因子μ1Bによるバソラテラルシグナルの認識機構

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上皮特異的に発現する蛋白輸送因子μ1Bによるバソラテラルシグナルの認識機構

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