Inibizione dell\u2019attivit\ue0 e dell\u2019espressione genica della metalloproteasi-9 da parte di Onopordum illyricum L. (Asteracee)

Abstract

Le metalloproteasi costituiscono una famiglia di enzimi proteolitici, coinvolti nel rimodellamento della matrice extracellulare. La sovraespressione della metalloproteasi-9 (MMP-9) conduce alla degradazione eccessiva della matrice extracellulare associata a tumori maligni, dove svolge un ruolo chiave nell\u2019angiogenesi e nell\u2019invasivit\ue0 tumorale, e influenza il processo di formazione e progressione della placca aterosclerotica. Alla dieta \ue8 stato attribuito un ruolo protettivo verso l\u2019insorgenza di patologie, come tumori e malattie cardiovascolari. L\u2019Onopordum illyricum L. \ue8 una pianta edibile, consumata in Sardegna come verdura, i cui capolini e giovani scapi sono mangiati crudi in insalata. Lo scopo di questo studio \ue8 stato quello di valutare l\u2019effetto di estratti e frazioni ottenuti dalle foglie e dagli scapi florali di O. illyricum sulla attivit\ue0, secrezione ed espressione genica della MMP-9. L\u2019attivit\ue0 e la secrezione della MMP-9 da parte di macrofagi peritoneali murini sono state valutate mediante zimografia; l\u2019attivit\ue0 del promotore della MMP-9 \ue8 stata valutata mediante trasfezione transiente in cellule CV-1. Sono stati saggiati l\u2019estratto acquoso, l\u2019estratto n-butanolico (n-BuOH) e l\u2019onopordopicrina, un lattone sesquiterpenico presente in elevate quantit\ue0 nella pianta, valutati nell\u2019intervallo di concentrazione 1-50 \ub5g/ml. L\u2019estratto acquoso inibiva debolmente l\u2019attivit\ue0 della MMP-9 (-10 e -20% a 25 e 50 \ub5g/ml, rispettivamente), mentre era inattivo sulla secrezione dell\u2019enzima. L\u2019onopordopicrina era invece inattiva su entrambi i parametri, anche alla pi\uf9 alta concentrazione saggiata (25 \ub5M). L\u2019estratto n-BuOH non aveva effetto sull\u2019attivit\ue0, mentre inibiva del 53% la secrezione della MMP-9 alla concentrazione 50 \ub5g/ml. Un effetto analogo a quello sulla secrezione era osservato sull\u2019attivit\ue0 del promotore della MMP-9: tale estratto esibiva un\u2019inibizione significativa e concentrazione dipendente dell\u2019attivit\ue0 del promotore della MMP-9, raggiungendo il 64% di inibizione alla concentrazione 50 \ub5g/ml. Allo scopo di identificare i principi attivi, l\u2019estratto n-BuOH \ue8 stato frazionato per cromatografia su Sephadex LH20, ottenendo otto frazioni. L\u2019attivit\ue0 inibitoria si concentrava principalmente nella frazione 1, che non aveva effetto sull\u2019attivit\ue0, ma inibiva la secrezione della MMP-9 (-49.1% a 50 \ub5g/ml). Tale effetto era accompagnato dall\u2019inibizione significativa e concentrazione dipendente dell\u2019attivit\ue0 del promotore della MMP-9 (IC50 \ub1 SD 12.2 \ub1 1.34 \ub5g/ml). Sono in corso esperimenti al fine di determinare se l\u2019inibizione dell\u2019attivit\ue0 del promotore della MMP-9 possa essere ascrivibile alla riduzione della trascrizione genica guidata dal fattore di trascrizione NF-kB. I risultati riportati supportano l\u2019ipotesi che l\u2019apporto di micronutrienti attraverso la dieta possa contribuire alla prevenzione di patologie, quali tumori e aterosclerosi, associate all\u2019eccessiva degradazione della matrice extracellulare