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第31回岡山実験動物研究会

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32研究会だより第31回岡山実験動物研究会平成8年6月29日 (土)午後1時10分から岡山県新技術振興財団との共催で川崎医科大学 (附属図書館小講堂)において､初鹿了先生のお世話で開催された｡初めに会長の栗本雅司所長 (㈱林原生物化学研究所 ･藤崎研究所)から開会のご挨拶があり､その後直ちに一般講演に移った｡一般講演 (1)は ｢昆虫腹筋の神経支配とその興奮性接合部位電位の生理学的性質｣と遷して川崎医科大学の川崎史子先生が講演された｡この司会は亀井千晃先生 (岡山大学薬学部)が担当された｡一般講演 (2)では ｢ヒト白血病細胞株のハムスター着生試験とその有効利用について｣と遷して㈱林原生物化学研究所 ･藤崎研究所の古谷聡美先生が講演された｡この司会は内藤一郎先生 (重井医学研究所)が担当された｡一般講演 (3)は ｢アレルギー性疾患モデルとしてのBN系ラットの有用性｣と遷して岡山大学薬学部の大石浩子さんが講演された｡この司会は大森斉先坐 (岡山大学工学部)が担当された｡一般講演 (4)は ｢4型コラーゲンの自己免疫疾患である抗GBN抗体腎炎の動物モデルによる解析｣と遷して重井医学研究所の佐渡義一先生が講演された｡この司会は新井成之先生 (㈱林原生物化学研究所 ･藤崎研究所)が担当された｡4題の一般講演が終了し､休憩をとった後､事務局から会務報告があった｡その内容は､(D平成7年度の活動報告 (第29回,第30回研究会の開催,会報12号の発行,理事会 ･常務理事会の開催について),②平成7年度の会計決算報告及び監事の中永征太郎先生,河本泰生先生によって会計監査がなされたこと,③第31回の研究会が岡山県新技術振興財団との共催で現在川崎医科大学で開催されていること,④第32回の研究会は岡山県新技術振興財団との共催で 12月上旬に開催を予定していること,⑤第 13号の研究会報の発行を進めていること,などであった｡会務報告後､特別講演が行われた｡特別講演は ｢広島大学医学部附属動物実験施設の紹介と実験動物の眼検査について｣と題して､広島大学医学部の古川敏紀先生が講演された｡この司会は岡山｣大学医学部の倉林譲先生が担当された｡この会には約50名の参加者があり､盛会のうちに終えた｡一般講演 日 )昆虫腹筋の神経支配とその興奮性接合部電位の生理学的性質川崎史子 (川崎医大 ･生理) ･喜多 弘(川崎医大 ･生理,川崎医福大 ･感覚矯正)フタホシコオロギ腹筋の筋線維は二重神経支配を受けており､一本の筋線維から､脊椎動物のfastとslowに対応する大小2種の興奮性接合部電位¢JP)が記録される｡ 我々は縦走腹筋として202筋を､横行腹筋として203筋を選び､それらの神経支配と2種のEJPの性質を調べた｡202筋は､第2腹部神経節(AG2)の同側にある2個の運動神経細胞 (M)によって支配され､一方が大EJPを､他方が小EJPを発生する｡ 202筋では､左右各半分が第1腹部神経節(AGl)の反対側のMと第3腹部神経節(AG3)の反対側のMとによって支配され､前者が大EJPを､後者が小EJPを生ずる｡202筋では､AG3の第1神経根(Rl)の刺激によって､同じ筋線維に大小のEJPが発生するが､小EJPの方が開催が低い｡一万203筋では､AGlのRl刺激によって大EJPが､AG3のRl刺激によって小EJPが同一筋線維に生ずる｡ 大小EJPの性質は､両方の筋肉で差が無い｡大小のEJPの性質を比較すると､大EJPの方が外液Ca2十濃度([caZ十]｡)に対する感受性が高く､0.25mMから発生するのに対して､小EJPは0.75mMで初めて出現する｡又EJP振幅の[Ca2十]｡ 依存性にも大小EJP間で差があり､log(EJP振幅)とlog([Ca2†]｡)の関係は大EJPの場合､[caZ†]｡ -0.25-0.5mMの範囲で､傾斜3.9の直線となり､小EJPでは､0.75-5血Mの範囲で､傾斜1.5の直線となる｡正常の[Ca2十]｡ -5mMでは､大EJPは筋線維の活動電位を伴うが､小EJPは活動電位を発生 しない｡両EJPとも3×10~6MのJorospidertoxinによって抑制され､神経伝達物質はglutamateであることが示唆された｡一般講演 (2)ヒト白血病細胞株のハムスター着生試験とその有効利用について古谷聡美､伊藤美千代､新井成之､栗本雅司(㈱林原生物化学研究所 ･藤崎研究所)ヒト白血病細胞株は､一般的にヌードマウスやスキッドマウスに着生しにくく､抗癌剤のL'LZVjvoでの評価が困難である｡ 我々は従来よりハムスターの体内でヒト白血病細胞株を増殖させている｡ 今回は､このハムスター法を利用したヒト白血病細胞株の着生試験結果と､担痛ハムスターを用いて行った抗癌剤効果試験について紹介する｡我々が行っているハムスター法とは､抗リンパ球血清により免疫抑制した新生児ハムスターにヒト白血病細胞株を移植し､ハムスターの体内で増殖させる方法である｡我々が所有しているヒト血球由来細胞株 のうち､101種 (Tcell27種､Bcell50種､non-T,non-Bcell 1O腫､MyelomonoIcytoidcel17種､non-L,non-Mcell7種)の細胞を用いてハムスター法で着生試験を行った｡その結果､ヒト白血病細胞株のハムスター-の着生は､順に82%､70%､40%､83%､86%と､ほぼ高い割合での着生が確認された｡また､ヒト白血病細胞株のハムスターの着生と細胞の分化の程度と関わりがあるかを考察したが､現段階では細胞の分化とハムスター-の着生には､関係が見られなかった｡次に､ヌードマウスやスキッドマウスに着生しにくいヒトT細胞急性 リンパ芽球白血病細胞株であるCCRF-CEMで､ハムスター法を利用して行った抗癌剤効果試験を紹介する｡ 新生児ハムスターにCCRF-CEMを移植し､TNFを移植の後12日目から32日目までの21日間腹腔内投与した｡TNF投与終了翌日の33日令の担癌ハムスターの生存率は､コントロール群47.2%に対 し､5,000JRU/bodyで66.7%､15,000JRU/bodyで83.3%､45,000JRU/bodyで83.3%と15,000及び45,000JRU/bodyのTNF投与によって生存率は有意(Fisher'sexactprobabilitytest)に上昇した｡このときの腺癌増殖抑制効果は､TNFの用量依存的な腫蕩増殖抑制効果が認められた｡この様に､ヒト白血病細胞株の着生ハムスターを用いて各種抗癌物質の効果試験が可能であることがわかった｡一般講演 (3)アレルギー性疾患モデルとしてのBN系ラットの有用性大石浩子 ･杉本幸雄 ･亀井千晃(岡山大学 ･薬学部)Brown-Norway(BN)系ラットは米国のWistar研究所で近交系として確立された有色ラットで､総IgE値が高く､特異的IgE抗体産生能も優れていることから､晴息及び鼻アレルギーなどの各種アレルギー性疾患モデルとして注目されている｡しかし､アレルギー性疾患における肥満細胞の重要性にも関わらず､BN系ラットの肥満細胞の性質に関する詳細な研究はほとんど行われていない｡そこでBN系ラットの肥満細胞の性質､ヒスタミン含量およびヒスタミン遊離物質に対する反応性について､Wistar系ラット33およびSI)系ラットと比較した｡実験には､日本チヤールス ･リバー社より入手した10-15週齢のBN系ラット,wistar系ラットおよびSD系ラットを使用した｡最初に腹腔肥満細胞について検討した結果､BN系ラットの腹腔肥満細胞は､wistar系ラットおよびsD系ラットと比較して有意に細胞直径が小さく､細胞数およびヒスタミン含量も少ないことが判明した｡しかし､代表的なヒスタミン遊離物質であるコンパウンド48/80によるヒスタミン遊離反応において､BN系ラット肥満細胞は最も高い感受性を示し､0.1pg/mlおよび0.3FLg/Jnlの濃度におけるヒスタミン遊離率は､wistar系ラットおよびsI)系ラットと比較して有意に高い値を示した｡さらに肺組織について検討したところ､BN系ラットの肺は､他の2系統と比較して組織重量比およびヒスタミン含量のいずれも有意に高いことが判明した｡一方BN系ラットの皮膚組織は､wistar系ラットおよびSI)系ラットと比較するとヒスタミン含量が有意に低かった｡以上の結果､BN系ラットの肥満細胞は､コンパウンド48/80に対して高い反応性を示したことから､抗アレルギー薬のヒスタミン遊離抑制作用の検討に有用であることが示唆された｡一般講演 (4)4型コラーゲンの自己免疫疾患である抗GBN抗体腎炎の動物モデルによる解析佐渡義一 (重井医学研究所免疫部門)1919年にGoodpastureによって報告された腎炎は1980年代から現在にかけて､その原因抗原､また発症のスタートとなる自己抗体の解析が進み､その全体像が明らかにされた｡私達は動物モデルを通して解析に参加してきた｡基底膜コラーゲンである4型コラーゲンは基底膜の主成分で現在α1鎖からα6鎖までの6種類のα鎖が報告されている｡各α鎖のアミノ酸配列はcI)NAを用いた手法で明らかになっている｡私達の研究室では1980年代にラットを用いた実験腎炎を開発し､発症のメカニズムを追求してきた｡原因抗原の解析は天然の抗原を可溶化した抗原をラットに免疫注射するモデルに始まり､精製抗原､合成ペプチド､そして組換え蛋白質によるモデルに至っている｡ 研究の進展にともない原因抗原がα3鎖とα4鎖の球状 ドメイン(NCl)にあることが明らかになってきている｡この腎炎研究の過程でラットリンパ節細胞を鍋田胞の起源とするモノクローナル抗体の新しい作製法(ラットリンパ節法)を開発した｡この方法では従来のマウス牌脱法にくらべ約 10倍の効率で陽性ハイブリドー マが得られる｡この方法を用いて合成ペ34プチドを抗原にしてこれら6種類のα鎖を識別するラットモノクローナル抗体を作製した｡これらの抗体は抗GBM抗体の原因抗原である4型コラーゲンの解析に役立ったばかりではなく､4型コラーゲンの遺伝性疾患であるアルポート症候群の診断をも可能にした｡広く生命科学の研究に役立つと思われるこのラットリンパ節法も合わせて紹介する｡※※※※※※※※※※※※･X･※※※米※※※※※※第 32回岡山実験動物研究会平成8年 11月29日 (金)午後 1時からルネサンス岡山 (ギャラリー･ルネサンス)において､岡山県新技術振興財団との共催で開催された｡はじめに会長の栗本雅司所長 (f耕木原生物化学研究所 ･藤崎研究所)から開会の御挨拶があり､その後､特別講演に移った｡特別講演 (1)は ｢大型ウサギの実験動物化に関する研究｣と題して秋田大学医学部の松田幸久先生が講演された｡この司会は倉林譲先生 (岡山大学医学部)が担当された｡特別講演 (2)は ｢コラーゲン遺伝子改変と動物疾患モデル｣と題して岡山大学医学部の二宮義文先生が講演された｡この司会は内藤一郎先生 (垂井医学研究所)が担当された｡2題の特別講演が終了した後､休憩をとり､その後､事務局から会務報告があった｡その内容を要約すると､①平成8年度の活動報告(第31回研究会の開催,会報 13号の発行,役月の選任,理事会 ･常務理事会の開催)について,②平成8年度の会計中間報告 (平成8年 1月1日-11月27日)について,③第33回の研究会の開催予定について,④研究会報 (第 14号)の発行について,などであった｡会務報告後､直ちに特別講演 (3)に移った｡この特別講演の演題は ｢マスト細胞分化異常動物｣で､大阪大学医学部の北村幸彦先生が講演された｡この司会は国枝哲夫先生 (岡山大学農学部)が担当された｡この会には約70名の参加者があった｡会終了後､同会場で講師の先生方を囲んでの懇親会が開かれ､名誉会員の矢部芳郎先生､県外からも会月の柴原寿行氏､三上博輝氏が御出席された｡会長の栗本雅司所長の開会の御挨拶に続いて､名誉会員の矢部芳郎先生に乾杯の音頭をとっていただいた｡懇親会場のカフェ ･ルネサンスは9月にオープンしたばかりで､落ち着いた､ムードある大変素晴しい所で､なごやかな雰囲気の中で会貞相互の親睦を深めた｡この会場を設営していただいた㈱林原生物化学研究所の栗本雅司所長はじめ関係者の皆様方に心より厚くお礼申し上げます｡特別講演会平成9年3月6日 (木)午後3時から岡山大学農学部において､Swiss Federal Institute ofTechnology教授のDr.Gerald Stranzingerを招いて特別講演会が開催された｡I)r.Stranzingerは文部省招碑研究員として来日中のところ､垂井医学研究所の沖垣達所長の取りはからいにより､岡山実験動物研究会での特別講演会が実現した｡当日は "RecentcytogeneticinvestigationsinlivestocksimEurope-anoverallvi帥-"との演題で1時間にわたって講演があり､司会は岡山大学農学部の国枝哲夫が担当した｡講演は細胞遺伝学の基礎から､最近のヨーロッパにおける家畜ゲノムプロジェクトの概要､臨床的に兄い出された染色体異常と疾患の関係にわたる広範な内容のものであり､講演終了後に質疑応答が行われた｡本特別講演会には岡山大学学生を含む多数の参加者があり､盛会のうちに終了した｡※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※※平成 8年度理事会報告平成8年度の理事会は2回開催された｡第 1回日は6月29日 (土)12時30分から13時まで川崎医科大学附属図書館で､第2回目は11月29日(金)12時から12時40分までカフェ･ルネサンス (ルネサンス岡山)で行われた｡第 1回理事会①平成7年度の活動報告 :岡山県新技術振興財団との共催による2回 (第29回,第30回)研究会の開催,第12号の研究会報の発行,常務理事会の開催(5月12日と9月19日の計2回)の報告があった｡②平成7年度の会計報告 :平成7年度 (1月1日から12月31日)の収入,支出,残高の状況について報告がなされ､中永征太郎先生,河本泰生先生の監事によって5月23日会計監査がなされた｡③平成8年度の活動計画 :第31回の研究会は本日(6月29日)川崎医科大学において開催され､また､第32回の研究会は12月上旬にいずれも岡山県新技術振興財団との共催で開催される予定であることが報告された｡具体的な開催日時,内容については後日常務理事会で検討することが了承された｡第2回理事会①平成8年度の活動状況 :第31回研究会が川崎医科大学で開催され､また第32回の研究会が本日(11月29日)､ギャラリー･ルネサンスでいず

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