Tese de mestrado. Biologia (Biologia Humana e Ambiente). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012A infecção por malaria começa com uma picada de um mosquito Anopheles infectado, através da transmissão de esporozoítos do protozoário pertencente ao género Plasmodium. Uma vez na circulação sanguínea, os esporozóies chegam rapidamente ao fígado onde atravessam a camada de células constituída por células endoteliais e células de Kuppfer (macrófagos residentes do fígado), acabando por alcançar e infectar os hepatócitos do fígado. Uma vez dentro destas células, cada um dos merozoítos inicia uma série de ciclos replicativos até se diferenciar numa nova forma parasitária chamada merozoíto. São estes merozoítos que uma vez libertados para a corrente sanguínea, vão infectar eritrócitos e desencadear a fase simptomática da doença. O principal objectivo deste trabalho é estudar o papel dos macrófagos durante a fase hepática da infecção por malária, adoptando a hipótese de que as células de Kupffer são suprimidas após infecção pelos esporozoítos. Para isso usou-se Plasmodium berghei ANKA obtido por dissecação de glândulas salivares de mosquitos Anopheles infectados, bem como o modelo murino C57BL/6 (espécie Mus musculus). A análise foi efectuada com recurso a microscopia confocal e ao nível do RNA através do uso de extractos de fígado de murganhos infectados e não infectados. Os nossos resultados sugerem que murganhos desprovidos de macrófagos induzem após infecção por esporozoítos, um recrutamento massivo de macrófagos para o fígado, bem como uma expressão genética substancial de genes pró-inflamatórios. Também se verificou que esse recrutamento de macrófagos para o fígado poderá ser desencadeado por substâncias presentes nas glândulas salivares de mosquitos e não por esporozoítos.Malaria infection starts with the bite of an infected Anopheles mosquito. Plasmodium sporozoites, the parasite form transmitted by mosquitos, are first deposited in the skin of the vertebrate host. After entering circulation sporozoites rapidly reach the liver, cross the sinusoidal cell layer composed of endothelial cells and Kupffer cells (the resident macrophages of the liver) and infect hepatocytes. Inside these cells the parasites replicate and develop into thousands of new parasites, called merozoites. When released into the blood stream, merozoites infect red blood cells causing the symptomatic stage of the disease. The main goal of this project is to study the role of macrophages during the liver stage of malaria infection, under the hypothesis that Kupffer cells are suppressed upon sporozoite infection. To this end we used the rodent model parasite Plasmodium berghei ANKA, which was obtained from the dissection of salivary glands of infected Anopheles mosquitos, and the rodent host C57BL/6 mice (species Mus musculus). The analysis was performed at the confocal microscopy level as well as at the RNA level using liver extracts of infected and non-infected animals. Genes of interest were screened and analyzed by qRT-PCR. Our results suggest that macrophage depleted mice induce upon sporozoite infection a massive recruitment of macrophages to the liver blood vessels and a substantial expression of pro-inflammatory genes. In addition, the recruitment of macrophages to the liver seems to be triggered by components present in salivary gland material of mosquitos rather than by sporozoites
