Tese de mestrado. Biologia (Biologia Molecular Humana). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2009A família Polyomaviridae é composta por vírus de pequenas dimensões que, após infectarem o hospedeiro, permanecem em estado latente. No entanto, em situações de imunossupressão, têm capacidade de induzir sintomatologia e/ou doença no hospedeiro. O Poliomavírus JC (JCV), o Poliomavírus BK (BKV) e o Poliomavírus MC (MCV), encontram-se associados à Leucoencefalopatia Multifocal Progressiva, à Nefropatia Associada a Poliomavírus e ao Carcinoma das Células de Merkel, respectivamente. Relativamente aos Poliomavírus KI (KIV) e WU (WUV), ainda não foi estabelecido um papel etiológico. Devido à importância clínica do JCV e do BKV, bem como à necessidade de aprofundar o conhecimento sobre os novos Poliomavírus, é fundamental desenvolver e implementar metodologias sensíveis e específicas para o seu diagnóstico e caracterização molecular. Os objectivos deste trabalho foram o desenvolvimento e a optimização de metodologias de biologia molecular, para a detecção e quantificação destes vírus, bem como a caracterização molecular dos Poliomavírus JC e BK, de forma a determinar a proporção dos diferentes tipos circulantes. Foram desenvolvidas e validadas metodologias para a detecção do BKV (sensibilidade e especificidade de 100%), KIV, WUV e MCV e para a quantificação do JCV e do WUV (especificidade de 100% e sensibilidade na ordem das 10 cópias/μl). A caracterização molecular permitiu identificar, no caso do JCV, os tipos 1B, 2A, 2B, 3A e 4 e, no caso do BKV, os tipos Ib-1, Ib-2, II e IV. Os tipos mais prevalentes foram, respectivamente, o 1B (56,0%) e o II (62,5%). O desenvolvimento e a optimização de técnicas de biologia molecular para o diagnóstico e estudo dos Poliomavírus, assumem uma relevância particular, pois são métodos de diagnóstico não invasivos e com uma sensibilidade e especificidade superiores às dos métodos convencionais, nomeadamente da imagiologia, citologia e histologia. Simultaneamente, podem ser utilizados para o estudo da etiopatologia dos novos Poliomavírus.Polyomaviridae comprises small dimension viruses, which stay in a latent phase after primary infection. However, in immunossupressed individuals, they are able to induce symptoms and/or disease. JC polyomavirus (JCV), BK polyomavirus (BKV) and MC polyomavirus (MCV) are associated to Progressive Multifocal Leukoencephalopathy, to Polyomavirus-Associated Nephropathy and to Merkel Cell Carcinoma, respectively. An etiological role was not yet established for the KI and WU polyomavirus (KIV and WUV). Due to the JCV and BKV clinical relevance, as well as the need to extend the knowledge about the new polyomaviruses, it is crucial to develop and implement specific and sensitive methodologies for their diagnosis and molecular characterization. The main objectives of this study were the development and the optimization of methodologies for the detection and the quantification of these viruses, and the molecular characterization of JC and BK polyomaviruses. Methodologies for the detection of BKV, which had a sensitivity and a specificity of 100%, KIV, WUV and MCV were developed and validated, as well as the quantification of JCV and WUV (specificity of 100% and sensitivity of 10 copies/μl). Molecular characterization allowed the identification of the JCV types 1B, 2A, 2B, 3A and 4, and the BKV types Ib-1, Ib-2, II and IV. The most prevalent types were the 1B (56,0%) and the II (62,5%), respectively. The development and optimization of molecular methods for the polyomaviruses diagnosis and study have a particular relevance, since they are non-invasive diagnosis methods with higher sensitivity and specificity, comparing with conventional methods, like imagiology, cytology and histology. At the same time, they can be applied to etiopathogenicity studies of the new polyomaviruses
