Tese de mestrado em Microbiologia Clínica, apresentada à Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa, 2008Os enterococos constituem uma grande parte da microflora do tracto gastrointestinal dos mamíferos. Durante muito tempo os enterococos foram considerados inofensivos para o Homem, no entanto tem-se observado um aumento de infecções por eles causadas, em paralelo com o aumento da sua resistência a antibióticos, incluindo resistência à vancomicina. Num estudo efectuado anteriormente, verificou-se a existência de isolados E. faecalis, tanto clínicos como alimentares, que apresentavam susceptibilidade ou uma resistência intermédia à vancomicina, mas que no entanto apresentavam o operão vanA incompleto, sendo denominados de VACISEf. No presente estudo tiparam-se 17 isolados VACISEf (de alimentos, de humanos e de animais) por MLST e MLVA, de modo a determinar a disseminação destes isolados e a determinar a sua relação com Enterococcus resistentes à vancomicina (VRE) presentes na base de dados (http://efaecalis.mlst.net/). Pelo método de MLST, verificou-se que estes isolados não se encontram relacionados entre si, não estando também relacionados com nenhuma estirpe resistente. A disseminação do transposão e consequentemente do gene vanA parece assim não ser clonal. O método MLVA descrito mostrou-se pouco eficiente no estudo de tipagem envolvendo isolados de diferentes ambientes. A tipagem molecular revelou a existência de isolados alimentares relacionados com isolados hospitalares que causaram infecção. Recorrendo à Suppression Subtractive Hybridization (SSH), procuraram-se as diferenças entre os genomas de um isolado hospitalar e de um isolado alimentar. Dos clones analisados (10%) apenas duas diferenças foram encontradas. Das restantes sequências analisadas é de salientar a detecção em ambos os isolados de um gene do plasmídeo pCF10, uma sequência homóloga a uma região do genoma da estirpe OG1-RF e também a existência de uma VIII sequência homóloga com uma região do genoma de S. aureus, o que evidencia a grande plasticidadeEnterococci constitute part of the microflora of the gastro intestinal tract of humans and other mammals. For many years enterococci were considered harmless for humans. However an increase of infections caused by these bacteria, and also an increase in antibiotic resistance has been reported in the last decades, including resistance to vancomycin. In a previous study the existence of E. faecalis strains, both of clinical and dairy origin, presenting susceptibility, or an intermediate resistance, to vancomycin, carrying an incomplete vanA operon were detected and designated as VACISEf. In the present study 17 VACISEf isolates (from food, humans and animals) were typed by MLST and MLVA in order to evaluate dissemination of these isolates and to determine their relation with VRE from the database (http://efaecalis.mlst.net/.). MLST revealed that those isolates are not related with each other, nor related with any VRE strain. Thus, vanA spread appears not to be clonal. MLVA revealed to be inefficient to study isolates from different environments. Molecular typing revealed the existence of dairy isolates related to hospital isolates. Using Suppression Subtractive Hybridization (SSH), differences between the genomes of an hospital isolate and a dairy isolate, were searched. Of the analysed clones (10%) only two differences were found. From the remaining analyzed sequences, it is important to highlight the detection of a gene of the pCF10 plasmid, an homologue sequence to the genome of the OG1-RF strain and an homologue sequence to a region of the S. aureus genome, which demonstrates the great plasticity of the E. faecalis genome
