LIU SHULING

劉 姝伶

English

Tsukuba Repository

Separate analysis of human papillomavirus
E6/E7 transcript variants in liquid-based
cytology samples from patients with cervical
neoplastic diseases
著者 LIU SHULING
著者別名 劉 ?伶
発行年 2018
その他のタイトル 子宮頸部腫瘍性疾患患者からの液状細胞診検体にお
けるヒトパピローマウイルスＥ６/Ｅ７転写変異体
の個別解析
学位授与大学 筑波大学 (University of Tsukuba)
学位授与年度 2018
報告番号 12102甲第8796号
URL http://hdl.handle.net/2241/00153957
-１ 
 
 
氏名    劉 妹怜   
学 位 の 種 類       EA 博士（医学） 
A学 位 記 番 号       EA 博甲第  ８７９６  号 
A学位授与年月       EA 平成 ３０年 ８月 ３１日 
A学位授与の要件       EA 学位規則第４条第１項該当 
A審 査 研 究 科       EA 人間総合科学研究科 
A学位論文題目       EA Separate analysis of human papillomavirus E6/E7 
transcript variants in liquid-based cytology 
samples from patients with cervical neoplastic 
diseases(子宮頸部腫瘍性疾患患者からの液状細胞診
検体におけるヒトパピローマウイルスＥ６/Ｅ７転写
変異体の個別解析) 
 
A主 査       EA     筑波大学教授 博士（医学） 佐藤 幸夫    
副 査       EA   筑波大学准教授 医学博士   内田 和彦   
A副 査       EA   筑波大学講師 博士（医学） 小島 崇宏    
A副 査       EA   筑波大学助教 博士（医学） 渡邊 幸秀   
 
論文の内容の要旨 
 
 劉妹怜氏の博士学位論文は、子宮頸癌発生におけるヒトパピローマウイルス(HPV)の E6 および E7 
mRNAの異なる役割を検討したものである。その要旨は以下のとおりである。 
 
 [目的] 過去の報告では、HPV E6 mRNAは全 gradeの Cervical intraepithelial neoplasia (CIN)でほ
ぼ一様に検出されるのに対し、E7 mRNA は病変の進行に従って検出率が増加すると報告されている。
著者は子宮頸癌発生における E6および E7 mRNAの異なる役割を明らかにすることを目的とした。 
[方法]  著者は HPVの E6 mRNA  および E7 mRNAを個別に検出できるコンセンサス・プライマ
ーに基づいた RT-PCRを使用して実験を行った。まずヒト頸癌細胞株 CaSki（HPV16陽性）および
HeLa（HPV18陽性）において E6/E7 mRNAの発現パターンを RT-PCRにより解析した。次に、組
織学的に確認された CINまたは子宮頸癌の患者 171名から採取した LBC検体から DNAおよび RNA
を抽出し、E6および E7 mRNAを解析した。HPVタイピングは L1-PCRおよび RFLP解析を行った。
CIN1は 16名、CIN2は 33名、CIN3は 83名、子宮頸癌は 39名だった。年齢の中央値は CIN1が 41.0
歳（23-59）, CIN2が 33.0歳(22-65), CIN3が 36.0歳(22-70), 子宮頸癌が 49.0歳(33-76)だった。経過観察
期間の中央値は 194日 (0-613)だった。 
[結果] HeLaおよび CaSki細胞における E6/E7 mRNAの発現パターンは過去の報告と一致した。こ
れらの細胞の E6/E7 RT-PCR産物を DNAシークエンス解析により確認している。171名の LBC検
-２ 
体において、E7 mRNAは CIN1の 6%、CIN2の 12%、CIN3の 24%、子宮頸癌の 54%に検出された。
E7 mRNA陽性は low gradeの CINから浸潤癌への進行と有意に関連し、一方 E6 mRNA、ハイリス
ク HPV DNAは関連を認めなかった。E6および E7 mRNA両者の陽性は HPV16/18 DNAと有意に関
連したがハイリスク HPVと有意には関連せず、一方 E6 mRNA陽性はハイリスク HPV DNAと有意
に関連したが、HPV16/18 DNAと有意には関連しなかった。E6および E7 mRNA両者の陽性は CIN2
以上の検出に関して高い特異度と低い感度を示し、一方ハイリスク HPV DNAは低い特異度と高い
感度を示した。CIN2以上の検出に関して E6および E7 mRNA両者の陽性はハイリスク HPV DNA
よりも更に高い陽性的中率を示した。CIN1-2 の経過観察を行った 31 名において、E6 および E7 
mRNA両者の陽性は異常細胞診の grade上昇と有意に関連し、一方 E6 mRNA、ハイリスクHPV DNA、
HPV16/18 DNAは関連性を認めなかったことを明らかにしている。 
[考察]  著者の報告は、病変進行と診断精度について、E7 mRNA陽性と E6/E7 mRNA両者の陽性
とを区別して解析したことが過去の報告と異なる。また著者は初めて経過観察患者について E6/E7 
mRNAの個別解析を行った。上述の結果から、E7 mRNAは E6 mRNAより強く発癌機序に関与し
ていると推測され、また E6/E7 mRNA両者の陽性は、HPV 16/18に特有の発癌特性の可能性がある
と考えられた。E7 は病変の現状と最も関連し、一方 E6/E7 両者の陽性は今後の病変進行に最も重
要と考えられる。また E6/E7 mRNAの個別解析は、ハイリスク HPV DNA検査よりも CIN2以上の
検出率が高いことが示された。他の HPV RNA検査は E6/E7 mRNAをまとめて検出するのに対し、
著者の RT-PCR は個別に検出するので、病変の進行をより正確に予測できると考えられ、E6/E7 
mRNAの個別解析は、CINの進行を HPV DNA検査よりも正確に予測できると期待される。 
[結論] 著者の結果は E7 mRNAが E6 mRNAよりも子宮頸癌発生により強く関与し、E6および E7 
mRNA両者が存在すると最も強い発癌作用を発揮するという過去の研究を更に支持している。一方、
E6および E7 mRNAの個別解析はハイリスク HPV DNA検査よりも CIN2以上の検出と病変進行の
予測に関してより有用であることを示唆している。 
 
 
審査の結果の要旨 
（批評） 
劉妹怜氏は、子宮頸癌発生におけるHPVの E6および E7 mRNAの異なる役割を検討し、E7 mRNA
が E6 mRNAよりも子宮頸癌発生により強く関与し、E6および E7 mRNA両者が存在すると最も強
い発癌作用を発揮することを明らかにした。更に E6および E7 mRNAの個別解析はハイリスクHPV 
DNA 検査と比較して病変進行の予測に関してより有用であることを示唆しており、子宮頸癌発症
のメカニズムの解明および子宮頸癌の早期発見に寄与するものと評価できる。 
平成 30 年 6 月 7 日、学位論文審査委員会において、審査委員全員出席のもと論文について説明を求
め、関連事項について質疑応答を行い、最終試験を行った。その結果、審査委員全員が合格と判定した。 
よって、著者は博士（医学）の学位を受けるのに十分な資格を有するものと認める。 
  


子宮頸部腫瘍性疾患患者からの液状細胞診検体におけるヒトパピローマウイルスＥ６/Ｅ７転写変異体の個別解析

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子宮頸部腫瘍性疾患患者からの液状細胞診検体におけるヒトパピローマウイルスＥ６/Ｅ７転写変異体の個別解析

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