この博士論文は内容の要約のみの公開（または一部非公開）になっています筑波大学 (University of Tsukuba)201

Saito Akimasa

齊藤 明允

Tsukuba Repository

Granzyme B derived from autoaggressive CD8 T
cell is crucial for the induction of interface
dermatitis with keratinocyte death
著者 Saito Akimasa
内容記述 この博士論文は内容の要約のみの公開（または一部
非公開）になっています
year 2018
その他のタイトル 自己反応性CD8 T細胞由来のグランザイムBは角化細
胞死を伴う苔癬反応の誘導に重要である
学位授与大学 筑波大学 (University of Tsukuba)
学位授与年度 2018
報告番号 12102甲第8850号
URL http://hdl.handle.net/2241/00153749
論 文 概 要 
 
論文題目：Granzyme B derived from autoaggressive 
CD8 T cell is crucial for the induction of interface 
dermatitis with keratinocyte death（自己反応性
CD8 T細胞由来のグランザイム Bは角化細胞死を伴
う苔癬反応の誘導に重要である） 
 
 
指導教員 藤本学 
  筑波大学人間総合科学研究科疾患制御医学専攻
皮膚科教授 
 
 （所属）筑波大学大学院博士課程人間総合科学研究
科疾患制御医学専攻 
 
 （氏名）齊藤明允 
 
目的： 
苔癬反応は、急性移植片対宿主病（GVHD）やループスエリテマトーデス、ス
ティーブンス・ジョンソン症候群・中毒性表皮壊死症などで見られる皮膚病理
学的所見で、表皮真皮境界部への炎症細胞浸潤と表皮角化細胞死を特徴とする。
ヒト検体を用いた研究では、細胞傷害性 T細胞のパーフォリン/グランザイム経
路及び Fas/Fasリガンド経路が、苔癬反応における角化細胞死の誘導に関与し
ていると推測されている。本研究では、苔癬反応マウスモデルを用いて、パー
フォリン/グランザイム（PRF1/Gzm）経路及び Fas/FasL経路の病態への役割
を明らかにする。 
方法： 
角化細胞特異的に卵白アルブミン（OVA）遺伝子を導入した K14-mOVA Tgマ
ウスをレシピエントとし、OVA特異的な T細胞受容体を有する CD8 T細胞で
ある OT-I細胞をドナー細胞として養子移入することで、急性 GVHD様の苔癬
反応を伴う皮膚粘膜症状を発症するマウスモデルを用いた。局在追跡目的に
GFPを遺伝子導入した、野生型OT-Iマウス、GzmB-KO OT-Iマウス、GzmA-KO 
OT-Iマウス、PRF1-KO OT-Iマウス、および FasL-KO OT-Iマウスをドナーと
し、それぞれのK14-mOVA Tgレシピエントマウスの皮膚粘膜症状を比較した。 
結果： 
K14-mOVA Tgマウスは OT-I細胞移入後 5日に認められ、14日目に最重症とな
る急性 GVHD様皮膚粘膜症状を発症し、この間 2相性の体重減少を呈した。ま
た、移入後 14日の耳介皮膚組織 HE染色標本では、苔癬反応を呈し、抗 GFP
抗体を用いた免疫染色で GFP陽性 OT-I細胞が真皮及び表皮内に浸潤し、
TUNEL assayにて細胞死に陥った TUNEL陽性角化細胞が多数認められた。 
GzmB-KOまたは PRF1-KO OT-I細胞移入 K14-mOVA Tgマウスは、皮膚粘膜
症状と第 2相体重減少を呈さず、GzmA-KO OT-I細胞移入 K14-mOVA Tgマウ
スは軽度の発症であった。GzmB-KO、PRF1-KO OT-I細胞移入 K14-mOVA Tg
マウスの耳介皮膚組織標本では苔癬反応は認められず、OT-I細胞浸潤も軽度で
真皮に限局しており、TUNEL陽性角化細胞を認めなかった。一方、FasL-KO 
OT-I細胞移入 K14-mOVA Tgマウスは、野生型 OT-I細胞移入マウスと同等の
皮膚粘膜症状を発症した。K14-mOVA Tgマウス移入後 OT-I細胞のフローサイ
トメトリー解析では、GzmB-KO、PRF1-KO、GzmA-KO OT-I細胞は野生型
OT-I細胞と同等に活性化し、同等の増殖能、サイトカイン産生能、ケモカイン
受容体CXCR3発現能を示した。表皮mRNAリアルタイムPCRでは、GzmB-KO
または PRF1-KO OT-I細胞を移入したレシピエントマウスにおいて、ケモカイ
ン CXCL9/10発現が低下していた。細胞傷害リリースアッセイでは、GzmB-KO 
OT-I細胞と PRF1-KO OT-I細胞は完全に、GzmA-KO OT-I細胞は部分的に、
細胞傷害活性が障害されていた。 
K14-mOVA Tgマウスに対し、OT-I細胞移入前に serpina3nを投与した予防投
与群では、移入後 14日までに皮膚粘膜症状を発症せず、第 2相体重減少も認め
なかった。OT-I細胞移入 5日後に serpina3nを投与した治療群では、発症して
いた皮膚粘膜症状は著明に改善し、第 2相体重減少も軽度であった。 
考察： 
OT-I細胞移入 K14-mOVA Tgマウスは、病理学的にも角化細胞死を伴う苔癬反
応を呈する皮膚粘膜疾患モデルマウスである。本モデルマウスの解析により、
苔癬反応は、細胞傷害性 CD8 T細胞依存性であり、Fas/FasL経路ではなく、
GzmB/PRF1経路を介した細胞傷害活性により誘導されることが判明した。
CD8 T細胞において、GzmBや PRF1が欠損していても、増殖や活性化には影
響がなく、細胞傷害活性のみが障害されていた。一方、角化細胞死の減少に伴
い、CD8 T細胞遊走ケモカイン CXCL9/10の発現は低下しており、GzmB-KO
または PRF1-KO OT-I細胞の皮膚組織への浸潤減少を説明するものと考えられ
た。一方、GzmAの介在する細胞傷害活性は部分的であった。GzmB活性を阻
害する serpina3n投与では、苔癬反応を伴う皮膚粘膜症状発症抑制のみならず、
治療効果も有していた。 
結論： 
角化細胞死を伴う苔癬反応型伴う皮膚粘膜疾患では、CD8 T細胞の
GzmB/PRF1経路が病態の主体である。急性 GVHDを始めとして、現在は、ス
テロイドなどの非特異的免疫抑制薬にて治療されているが、GzmB標的療法は
有望な治療戦略と考えられ、生理活性物質である serpina3nは新規生物学的製
剤の候補となり得る。 
 
 
 
 
 


自己反応性CD8 T細胞由来のグランザイムBは角化細胞死を伴う苔癬反応の誘導に重要である

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自己反応性CD8 T細胞由来のグランザイムBは角化細胞死を伴う苔癬反応の誘導に重要である

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