A WFIKKN fehérjék és a miosztatin, GDF11 közötti kölcsönhatás jellemzése = Characterization of the interaction of WFIKKN1 and WFIKKN2 with Myostatin and GDF11.
Kimutattuk, hogy a WFIKKN fehérjék specifikus és hatékony inhibitorai a miosztatin/GDF8 és GDF11 növekedési faktoroknak. - Felületi plazmon rezonancia (SPR) mérésekkel megállapítottuk, hogy mindkét fehérje nagy affinitással (Kd ~ 10-8- 10-10M) köti a GDF8 és GDF11 növekedési faktorokat. A WFIKKN fehérjék elsősorban a follisztatin homológ (FS) doménjük révén kötik a miosztatint, de a netrin homológ (NTR) domén is részt vesz a kölcsönhatás kialakításában. - Kompeticiós SPR mérésekkel kimutattuk, hogy a WFIKKN fehérjék hatékonyan gátolják a miosztatin és GDF11 kötődését a receptoruk, az Activin-Receptor IIb ligand-kötő doménjéhez. - A miosztatin és GDF11 jelátvitel detektálására alkalmas riporter rendszerben mindkét WFIKKN fehérje hatékonyan gátolta a miosztatin és GDF11 növekedési faktorok által kiváltott jelátvitelt. - SPR mérésekkel megállapítottuk, hogy a WFIKKN fehérjék jelentős affinitással (Kd ~ 10-7- 10-8M) kötnek több más, a TGF? családba tartozó növekedési faktort is: a TGF?1-t, BMP2-t, BMP4-t. Gyengébb kölcsönhatást detektáltunk a BMP3 és BMP8b-vel és nem volt mérhető kölcsönhatás az Aktivin A-val. - A WFIKKN fehérjék és a TGF?1, BMP2 és BMP4 növekedési faktorok közötti kölcsönhatás ellenére riporter vizsgálatokban a WFIKKN fehérjék nem gátolták a TGF?1, BMP2 és BMP4 által kváltott jelátvitelt. Összegezve: eredményeink azt mutatják, hogy a WFIKKN1 és WFIKKN2 a miosztatin és GDF11 növekedési faktorok specifikus inhibitorai. | We have shown that WFIKKN proteins are potent and specific inhibitors of myostatin/GDF8 and GDF11, since - surface plasmon resonance measurements revealed that both WFIKKN1 and WFIKKN2 have high affinity (Kd ~ 10-8- 10-10M) for myostatin/GDF8 and GDF11. The interactions are mediated primarily by the follistatin homolog domains of WFIKKN proteins, but their NTR domains also contribute to these protein-protein interactions. - competitive SPR measurements have shown that WFIKKN1 and WFIKKN2 inhibit the interaction of myostatin and GDF11 with the extracellular ligand-binding domain of their high affinity receptor, Activin receptor IIb. - in luciferase reporter assays both WFIKKN proteins are potent inhibitors of the signaling activity of myostatin and GDF11. - SPR interaction measurements with several additional representatives of TGF? family revealed that both WFIKKN1 and WFIKKN2 bind TGF?1, BMP2 and BMP4 with relatively high affinity (Kd ~ 10-7- 10-8 M). WFIKKN proteins showed weak affinity for growth factors BMP3 and BMP8b, and they did not bind to Activin A. - Despite their significant affinity for TGF?1, BMP2 and BMP4, in reporter assays neither WFIKKN1 nor WFIKKN2 inhibited the signaling activity of TGF?1, BMP2 and BMP4. In summary: our data indicate that WFIKKN proteins block the signalling activity of myostatin and GDF11 specifically and potently by sequestering these growth factors thereby preventing their binding to their receptors