thesis

Zelluläre Transkriptionsprofile nach Adenovirus Typ 12 Infektion oder Tumorinduktion

Abstract

Die Infektion menschlicher Zellen mit Adenovirus Typ 12 (Ad12) verläuft produktiv, während sie in Hamsterzellen abortiv verläuft. In der vorliegenden Arbeit benutzten wir die DNA Microarraytechnik, um die Transkriptionsprofile zellulärer Gene nach einer Infektion mit Ad12 zu bestimmen. Die Microarraydaten wurden für 13 zelluläre Gene, die signifikante Änderungen nach der Ad12-Infektion zeigten, durch quantitative real-time PCR validiert. 12 h p.i. werden die zellulären Immunantwortgene G1P2, IFIT1 und IFIT2 zwischen 10- und 30-fach im Vergleich zu schein-infizierten Zellen nach oben reguliert. Zu späteren Zeitpunkten der Infektion, wenn die Mehrheit der regulierten Gene abgeschaltet wurde, zeigen eine begrenzte Anzahl zellulärer Gene eine erhöhte Transkriptionsaktivität im Bereich von Faktor 3 oder weniger. Diese Gene gehören zu den Klassen der Signaltransduktionsgene, Regulatoren der Transkription oder sind bei der Proteindegradation involviert. Der eukaryontische Translationsinitiationsfaktor 4 ist hochreguliert, und eines der zum Major Histocompatibility Komplex gehörenden Gene ist negativ reguliert. Für zwei der Gene, dem hochregulierten CTSF-Gen und dem herunterregulierten CYR61-Gen, wurden die transkriptionellen Veränderungen auch auf der Proteinebene durch Westerntransferanalysen bestätigt. Zusätzlich wurden die Transkriptionsprofile abortiv infizierter BHK21-Zellen sowie sechs Ad12-induzierter Hamstertumore bestimmt. Die Veränderungen einer Großzahl zellulärer Gene wurde durch die Nutzung von Mausgenmicroarrays, auf die circa 1.980 Mausgene mit einer Homologie zwischen 87 und 96% zu Hamstergenen aufgebracht waren, erfasst. Die zellulären Expressionsprofile Ad12-infizierter BHK21-Zellen zeigten keine signifikanten Veränderungen. Die verschiedenen Ad12-induzierten Tumore zeigten Ähnlichkeiten und Unterschiede in der Transkription zellulärer Gene aus verschiedenen Genklassen. Um den Replikationsblock von Ad12 in BHK21-Zellen zu überkommen, wurde der menschliche Coxsackie und Adenovirusrezeptor (hCAR) in BHK21-Zellen transfiziert und anschließend wurden die Zellen mit Ad12 infiziert. Radioaktives metabolisches Markieren mit 33P-Orthophosphat der in diesen Zellen synthetisierten DNA zeigte Meßspitzen, die neu synthetisierte Ad12-DNA indizierte. Allerdings erbrachten anschließend durchgeführte Plaque Assays bisher unschlüssige Resultate. Es ist zu Zeit noch nicht eindeutig geklärt, ob die Transfektion von hCAR in BHK21-Zellen dafür ausreicht, über die Ad12 DNA Synthese hinaus auch zur Neubildung infektiöser Ad12 Partikel zu führen

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