Se ha establecido en trabajos anteriores (1-4) que, si bien el contenido en palmitato de sitosterol es un buen índice de la presencia de productos de Triticum aestivum en las pastas alimenticias, algunas variedades de dicha especie no podían ser detectadas debido a que su contenido en palmitato de sitosterol era similar al de las variedades de T. durum. La búsqueda de nuevas diferencias bioquímicas interespecíficas está justificada, no sólo por este hecho, sino también porque para obtener una buena aproximación en la determinación cuantitativa de productos de T. aestivum en las pastas alimenticias es necesario emplear más de un índice bioquímico, ya que todos ellos han de presentar cierta variabilidad intraespecífica

Garcia Faure, R.

García Olmedo, Francisco

Sotelo Aboy, I.

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Archivo Digital UPM

Identificación de productos de Triticum Aestivum en las pastas alimenticias. IV. Lipoproteínas solubles en éter de petróleo

Servicio de Coordinación de Bibliotecas de la Universidad Politécnica de Madrid

IDENTIFICACIÓN DE PRODUCTOS DE TRITICUM 
AESTIVVM EN LAS PASTAS ALIMENTICIAS IV. 
LIPOPROTEINAS SOLUBLES EN ÉTER 
DE PETRÓLEO (*) 
POR 
F. G A R C Í A O L M E D O , I. S O T E L O y R. G A R C Í A F A U R E 
(*) El presente trabajo ha sido financiado en parte con una subvención (Grant 
FG-Sp-134) del U.S. Department of Agriculture, Foieign Research and Technical 
Programs División. 
Se ha establecido en trabajos anteriores (1-4) que, si bien el conte-
nido en palmitato de sitosterol es un buen índice de la presencia de pro-
ductos de Triticum aestivum en las pastas alimenticias, algunas varieda-
des de dicha especie no podían ser detectadas debido a que su conteni-
do en palmitato de sitosterol era similar al de las variedades de T. du-
rum. La búsqueda de nuevas diferencias bioquímicas interespecíficas 
está justificada, no sólo por este hecho, sino también porque para ob-
tener una buena aproximación en la determinación cuantitativa de pro-
ductos de T. aestivum en las pastas alimenticias es necesario emplear 
más de un índice bioquímico, ya que todos ellos han de presentar cierta 
variabilidad intraespecífica. 
En un estudio preliminar con muestras compuestas (5), se sec-
cionaron varias características bioquímcas que potencialmente podían ser 
empleadas para el fin propuesto. Entre éstas se incluyeron las lipoproteí-
nas solubles en éter de petróleo, fracción que no había sido estudiada 
desde que Balls y col. (6) en 1942, la caracterizaron parcialmente en T. 
aestivum. En el presente trabajo, se ha abordado la caracterización y de-
terminación cuantitativa de estas proteínas en variedades de las especies 
T. aestivum y T. durum. Con posterioridad a la terminación de nuestro 
estudio han aparecido dos trabajos realizados por Nimmo y col. (7) y 
Fisher y col. (8), comparando las proteínas solubles en éter de petróleo 
con determinados componentes de las globulinas. En los resultados que 
exponemos a continuación, hemos evitado incluir algunos puntos ya tra-
tados por dichos investigadores. 
MATKRIAI, Y MÉTODOS. 
Muestras. 
Se emplearon harinas de 40 variedades de T. aestivum y 26 de 
T. durum. Estas fueron obtenidas por molienda normal en un molino 
experimental Buhler. 
En los experimentos para estudiar la distribución de las lipopro-
teínas en el grano se obtuvieron fracciones correspondientes a las tres 
436 ANALES DE INVESTIGACIONES AGRONÓMICAS 
trituraciones, las tres compresiones, harina remolida, tercerillas y sal-
vado hoja. 
Extracción y determinación cuantitativa de la lipoproteíua soluble en 
éter de petróleo. 
Se extrae la harina (20 gr.) con 80 mi. de éter de petróleo (p.e. 35o-
60° C.) en una columna de 2,5 cm. de diámetro. Se elimina el disolvente 
en un rotoevaporador in vacuo a 40° C , y el extracto se redisuelve en 
éter y se transfiere a un tubo de centrífuga sin que el volumen final ex-
ceda de 1,5 mi. El tubo se coloca en un baño de hielo y se añaden tres 
volúmenes de cloruro de hidrógeno 1 N en etanol. Después de una hora, 
el precipitado formado se centrifuga a 5.000 X g; se lava dos veces con 
etanol frío y dos veces con éter de petróleo, y se deja secar. El residuo 
seco se disuelve en agua y se determina cuantitativamente por la reac-
ción colorimétrica del biuret, usando albúmina de suero bovino cristali-
na como patrón. 
Electroforesis. 
El fraccionamiento por electroforesis se ha efectuado sobre geles de 
almidón preparados con tampón lactato de aluminio, p H 3,2, fuerza ió-
nica 0,1, y urea 3 M (9). La inserción de muestra se hizo impregnando 
un cuadro de papel (10 mm. X 3 mm., AVliatman, núm. 3) con una so-
lución acuosa de la proteína (3 mg./ml. para resolver los componentes 
principales y 25 mg./ml. para los componentes menores). 
Después de la electroforesis los geles se tiñeron con una solución de 
nigrosina (0,05 por 100 en ácido acético: agua 5 0 : 5 0 V / V ) durante 
veintiuna horas. A continuación se lavaron con agua y se destiñeron en 
etanol del 80 por 100 durante cinco horas. Finalmente, se transfirieron 
a agua. Las medidas densitométricas se realizaron en un Chromoscan 
(Joyce & Loebl). 
Cromatografía sobre Sephadex. 
Se prepararon columnas de Sephadex G-100 y G-50 para el frac-
cionamiento de las proteínas descritas anteriormente. El tamaño de co-
lumna fue en ambos casos de 1,2 X 50 cm. Las eluciones se realizaron 
con tampón lactado de aluminio, p H 3,2, urea 3 M, o, alternativamente, 
con cloruro sódico al 3 por 100. La muestra se aplicó en un volumen 
de 0,5 mi. y se recogieron fracciones de 1 mi. con un flujo de 25 mi./hora. 
IDENTIFICACIÓN DE PRODUCTOS DE " T R I T I C U M Á E S T I V U M " . . . 4 3 7 
En los experimentos de oxidación-reducción se empleó una columna 
de Sephadex G-25, 0,8 X 5 cm., para separar el beta-mercaptoetanol 
La elución se hizo con tampón Tris (trishidroximetil aminoetano) 
pH 8,2, urea 3 M. 
RESULTADOS Y DISCUSIÓN. 
Fraccionamiento y caracterización de las Upo proteínas solubles en éter 
de petróleo. 
La heterogeneidad de las proteínas precipitadas a partir de extrac-
tos con éter de petróleo de endospermo de T. aestivum fue ya sugerida 
por Balls y col. (6) ; quienes cristalizaron un componente con alto conte-
nido en azufre, al que denominaron purotionina. Por electroforesis del 
precipitado bruto se obtienen al menos seis fracciones (fig. 2). Las dos 
principales migran casi juntas y se corresponden al parecer con la pu-
rotionina (7, 8). El fraccionamiento sobre Sephadex G-50 da lugar a 
dos fracciones: una que es prácticamente excluida y otra cuyo volumen 
de elución corresponde a un peso molecular aproximado de 10,000 (fi-
gura 1). La primera es retenida en el origen durante la electroforesis, 
no dando bandas detectables. La segunda incluye las bandas observadas 
en el extracto bruto, pues aunque las de menor movilidad electroforé-
tica poseen un peso molecular algo mayor y son eluidas algo antes que 
el par de la purotionina, no son separadas totalmente de éste (fig. 1). 
Con la columna de Sephadex G-100 se obtienen resultados similares 
que con el G-50, si bien la proporción de material excluido es menor y 
aparece algún material intermedio de peso molecular no definido. Esto 
significa que la primera fracción obtenida en el Sephadex G-50 es hete-
rogénea. Cuando se precipita el extracto bruto a partir de etanol al 90 
por 100 en las condiciones empleadas por Balls y col. (6), la proporción 
de material excluido del Sephadex G-50 aumenta tanto en el precipitado 
como en el sobrenadante, lo que interpretamos como una polimerización 
de las unidades de purotionina por intercambio sulfhidrilo-disulfuro, mien-
tras están en medio acuoso a elevada concentración (fig. 2). Este fenó-
meno puede ser responsable en parte del contenido relativamente alto 
de cistina encontrado por Nimmo y col. (7) y Fisher y col. (8) en la 
fracción de mayor peso molecular. 
Cuando la purotionina se somete a condiciones reductoras selectivas 
para los enlaces disulfuro (Tris, pH 8,2, Urea 3 M, 10 por 100 beta-
4 3 8 ANALES DE INVESTIGACIONES AGRONÓMICAS 
0-9 Abs. 
0.5 
0,0 
0.9wiAbs. 
as-
co 
LIPOPROTEÍNA 
G-50 
0.9nAbs 
0.5 
^ao 
20 30 40 50 mt. 
® 
ETANOL 90V. 
0.9-nAbs 
SOBRENADANTE 
G-50 
0,5 
20 30 
© 
40 
aol 
50ml. 
LIPOPROTEÍNA 
G-100 
PRECIPITADO 
G-50 
20 30 40 
50ml. 
50 mi. 
Fig. 1. — a) Fraccionamiento de la lipoproteína extraída por éter de petróleo sobre 
Sephadex G-50. h) ídem sobre Sephadex G-100. c) y d) Sobrenadante y precipitado 
que resulta de la purificación por precipitación con etanol. 
mercaptoetanol) se produce una reducción cuantitativa e inmediata del 
par de bandas de la purotionina, que dan lugar a una sola banda de mo-
vilidad electroforática notablemente menor (fig. 3). En medio ácido (lac-
'•<A 
Fig. 2. — Fraccionamiento por electroforesis de: a) lipoproteína total extraída por éter 
de petróleo, h) fracción 35 de la figura 2-a, c) fracción 31, d) fracción 29, e) fracción 27. 
* ^ < * . 
a b c d ÜJ bx c, rf, o 2 
Fig. 3. — Electroforesis sobre gel de almidón, lactado de aluminio, pH 3,2 urea 3M, 
de purotionina bruta disuelta en: a) Tampón Tris, pH 8,2 urea 3M 10 % cíe beta-mer-
captoetanol; tiempo, un minuto. ai) ídem a las veinticuatro horas, a-.) ídem veinticuatro 
horas después de eliminar el beta-mercaptoetanol. b) Tampón Tris, pH 8,2 urea 3M; 
tiempo, un minuto, ¿>i) ídem a las veinticuatro horas, c) y Ci) Tampón lactato, pH 3,2 
urea 3M, 10 % beta-mercaptoetanol al minuto y a las veinticuatro horas, d) y di) Tam-
pón lactato de aluminio, ph 3,2 urea 3 M, al minuto y a las veinticuatro horas. 
IDENTIFICACIÓN DE PRODUCTOS DE "TRITICUM AESTIVUM". . . 4 3 9 
tato de aluminio, pH 3,2, Urea 3 M, 10 por 100 beta-mercaptoetanol) 
la reducción transcurre muy lentamente, y a las veinticuatro horas aún 
no se ha completado. Si se separa el beta-mercaptoetanol mediante una 
columna de Sephadex G-25, eluyendo con tampón básico (Tris, p H 8,2, 
Urea 3 M) se consigue la reoxidación de la purotionina después de vein-
ticuatro horas al aire, dando las dos bandas primitivas (fig. 3). Estos 
resultados sugieren la posibilidad de que el par de bandas de la purotio-
nina corresponda a dos formas oxidadas de la misma cadena polipeptí-
dica. 
Determinación del contenido total de lipoproteína. 
El método descrito en la sección correspondiente permite la deter-
minación cuantitativa I— < 0,051 de la proteína total extraida con éter 
de petróleo. No se obtuvieron incrementos significativos en el rendi-
miento ni doblando el volumen de éter de petróleo empleado en la ex-
tracción, ni moliendo el endospermo a un mayor grado de finura. 
Distribución de la- proteína extraida por éter de petróleo en el grano de 
trigo. 
Se ha estudiado la variación del contenido en lipoproteína con el 
rendimiento en la molienda. Se obtuvieron nueve fracciones de molien-
da y se ordenaron de menor a mayor contenido de cenizas. En la figu-
ra 4 se presentan los contenidos en lipoproteína y cenizas de las fraccio-
nes sucesivamente acumuladas frente a rendimiento en la molienda. Se 
observa una distribución uniforme de la lipoproteína en el endospermo, 
tanto en T. durum como en T. aestivum (fig. 4). Variaciones normales 
en el rendimiento en la molienda no afectan, por tanto, al contenido en 
lipoproteína de la harina. ,: 
Estudio de variedades individuales. Cantidad mínima de T. aestivum en 
una mezcla en función de la lipoproteína total. 
Se ha determinado y fraccionado por electroforesis la lipoproteína 
extraida con éter de petróleo en 40 variedades de T. aestivum y 26 de 
T. durum. No se encontraron diferencias interespecíficas en las distri-
buciones electroforéticas de las variedades estudiadas. Por el contra-
rio, la cantidad total de lipoproteína sí resultó ser una característica es-
pecífica, siendo superior en T. aestivum que en T. durum. En el cua-
440 ANALES DE INVESTIGACIONES AGRONÓMICAS 
40 
8 3°A 
O) 
E 
E 2 0 
O) 
o 
i_ 
a. 
o 
•e- 10 
A-
A 
T. durum A 
T.aest ivum o 
- 4 - * ^ ' 
-A-A AAA 
o-—o -oooo-
50 
Extracción % 
100 
Fig. 4. — Variación del contenido en lipoproteína extraída por éter de petróleo con 
el grado de extracción en la molienda. 
dro I se consignan los contenidos en lipoproteína de la harina de las 
66 variedades estudiadas. Los valores obtenidos para T. durum no su-
peran los 20 mg./lOO gr. Sólo cuatro variedades de T. aestwum están 
comprendidas en el intervalo de T. durum, y 5 más están próximas a 
80mg./l00g 
Fig. 5. — Contenido mínimo de T. aestwum en una mezcla en función de la lipopro-
teína extraída por éter de petróleo. 
IDENTIFICACIÓN DE PRODUCTOS DE "TRITICUM AESTIVUM". . . 4 4 1 
él. Los limites superior e inferior de los intervalos de variación de 
T. durum y T. aestivum se han confirmado analizando muestras de las 
variedades extremas procedentes de distintas zonas de cultivo. Toman-
do como base los valores superiores obtenidos para cada especie, puede 
calcularse la cantidad mínima de T. aestivum en función del contenido en 
lipoproteína (fig. 5). Contenidos por encima de los 20 mg./lOO gr. indi-
can la presencia de T. aestivum, pero niveles inferiores a éste no implican 
su ausencia. Sin embargo, las variedades no detectadas por este método 
si lo son por el del palmitato de sitosterol (cuadro I), por lo que el uso 
conjunto de ambos índices resuelve el problema sin excepciones. 
CUADRO T. — Contenido en lipoproteína (éter de petróleo) de varieda-
des de T. aestivum 3) T. durum. 
T. a e st i v u m 
Variedad 
"Dr. Mazet" 
"Teja" 
"Negrillo" 
"Chamorro" 
"Pa ís" 
"Impeto" (*) 
"Libero" (*) 
"Navarro 105" (*).. 
ms/100 g 
78 
51 
49 
49 
48 
47 
46 
45 
" F . Aurora" <+i 
"Cascón" 
"Ariana" 
"Mará" (*) 
"Rex" 
"Navarro 1?2" (*) 
40 
40 
35 
35 
"Híbrido J - 1 " .....i 35 
1 
"Pane 247" (*) ....¡ 34 
"Candeal" 
"Estrella" 
"Lusitano" 
"Aragón 03" 
34 
32 
30 
29 
Variedad 
"Languedoc" 
"Restauragáo" 
"Cabezorro" 
"Pirana" 
"x\utonomía" 
" M n r a h a " 
"Dimas" 
"H. RedWinter A" 
"H. Red'Winter B " 
"Pane 2" 
"Chaimite" 
"Rieti" 
"Pane 3 " 
"Mncbn" 
"Rojo Basto" 
"Colorado" 
"Mort" 
"Roma" 
"Ardica" 
mg/100g 
29 
28 
28 
28 
28 
27 
27 
27 
26 
26 
25 
23 
23 
23 
23 
22 
20 
18 
18 
11 
T. durum 
Variedad 
"Bxipi" 
"Híbrido D " 
"Griffoni" 
"Far to" 
"Kubanka" 
"Mindum" 
"Garigliano" 
"Alcalá la Real" .. 
Mezcla comercial, 
USA (A) 
"Bidi 17" 
" S . Capelli" 
"Speelmarz" 
Mezcla comercial, 
USA (B) 
"Wells" 
"Zaramek" 
"Leeds" 
"Alaga" 
"Lakota" 
"Capeiti" 
"Jerez 36" 
mg/100g 
20 
20 
20 
19 
18 
17 
15 
15 
14 
13 
12 
12 
11 
10 
9 
9 
8 
8 
8 
8 
8 
7 
7 
5 
3 
(*) Variedades no. detectables por el método del palmitato de sitosterol. 
4 4 2 ANALES DE INVESTIGACIONES AGRONÓMICAS 
R E S U M E N 
Se han caracterizado las lipoproteínas extraídas por éter de petró-
leo en el endospermo de Triticum aestivum y Triticum durum, emplean-
do las técnicas de electroforesis y filtración molecular sobre Sephadex 
G-50 y G-100. 
Se propone un método, reproducible (— < 0,05) para la determina-
ción de la lipoproteína total. Se ha demostrado que el contenido en li-
poproteína de la harina no es afectado por variaciones normales en el 
rendimiento de la molienda. Se ha determinado dicho contenido en 40 
variedades de T. aestivum y 26 de T. durum. En esta última especie no 
se han encontrado valores que superen los 20 mg./lOO gr., mientras que 
todas las variedades de T. aestivum, excepto cuatro, presentan valores 
superiores a éste (hasta 78 mg./lOO gr.). Todas las variedades de T. aes-
tivum con bajo contenido en palmitato de sitosterol lo tienen alto en li-
poproteína (por encima de 30 mg./lOO gr.) y viceversa. El uso de am-
bos parámetros permite la diferenciación interespecífica sin excepciones. 
Se calcula la cantidad mínima de T. aestivum en una mezcla en función 
del contenido en lipoproteína. 
SUMMARY 
"Identification of Triticum aestivum producís in alimeníary paste. IV. Pe-
troleum ether soluble lipoproíeins", by F. GARCÍA-OLMEDO, I. SOTELO and R. GAR-
CÍA-FAURE, Anal. Inst. Nac. Invest. Agr. (Madrid), XVII , 2 (1968). 
Total petroleum ether extractable protein is determined by a reproducible 
procedure I — < 0,05). 
\X ' / -
Petroleum ether lipoprotein contení of flour ís not significaíively effected 
by normal variaíions in milling yield. A survey of 40 T. aestivum and 26 T. du-
rum varieíies shows íhaí lipoproíein contení of íhe laíer does noí exceed 
20 mg./lOO gr. All buí 4 of íhe T. aestivum varieíies have coníenís higher íhan 
thaí (up ío 78 mg./lOO gr.). 
All T. aestivum varieíies wiíh low siíosíeryl palmiíaíe coníení have high 
lipoproíein (abovq 30 mg./lOO gr.) and viceversa. Consequeníly, using boíh bio-
chemical parameíers no ambiguiíy is lefí in íhe iníerspecific differenciaíion. 
IDENTIFICACIÓN DE PRODUCTOS DE " T R I T I C U M A E S T I V U M " . . . 443 
Mínimum amount of T. aestivum in a mix tu re is calculated as a function of 
lipoprotein contení. 
F u r t h e r character izat ion of the pet. ether extracted protein by electropho-
resis and gel filtration did not show consistent interspecific differences. 
(Los autores desean agradecer la valiosa asistencia técnica de 
A. M. Mingo Castel.) 
B I B L I O G R A F Í A 
1. GARCÍA F A U R E , R. ; GARCÍA OLMEDO, F . ; SOTELO, I . ; SALTO, M . : Boletín 
I.N.I.A., 53, 395, 1965. 
2. GARCÍA O L M E D O , F . : Boletín I.N.I.A., 53, 409, 1965. 
3. GARCÍA F A U R E , R. ; GARCÍA OLMEDO, F . ; V A L L E J O , J. M. :< Tecn. Mol, 19, 4, 
114, 1968. 
4. GARCÍA F A U R E , R. ; GARCÍA OLMEDO, F . ; V A L L E J O , J. M . : / . Sci. Food Agrie, 
19, 6, 322, 1968. 
5. GARCÍA F A U R E , R . : 3rd Annual Report, March 1967, U.S .D.A. Proyect E 2 5 -
A M S - 7 , Grant FG-Sp-134 . 
6. B A L L S , A. K . ; H A L E , W . S . ; H A R R I S , T . H . : Cereal Chem., 19, 279, 1942. 
7. N I M M O , C. C. ; O ' S U L L I V A N , M. T . ; BERNARDIN, J. E . : Cereal Chem., 45, 28, 
1968. 
8. F I S H E R , N . ; REDMAN, D. G.; E L T O N , G. A. H . : Cereal Chem., 45, 48, 1968. 


Identificación de productos de Triticum Aestivum en las pastas alimenticias. IV. Lipoproteínas solubles en éter de petróleo

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