research

DHAC-indukált transzgén-reaktiváció a 35S-gshI GMO szürkenyárban (Populus × canescens).

Abstract

A transzgénikus szürkenyár (Populus × canescens) klónokba (6lgl, 11ggs) épített gshI-transzgén (E.coli), valamint az identikus (endogén) nyár gsh1 gén relatív expressziós szintjét határoztuk meg qRT-PCR analízissel (kvantitatív rerverz transzkriptáz polimeráz láncreakcióval) demetilációs hatású DHAC (5,6-dihidro-5'-azacitidin hidroklorid) kezelés indukciójával, a konstitutívan expresszálódó α-tubulin gén expressziójának kontrolljában. A kiértékelésben 2(−ΔΔCt) módszert alkalmaztuk. A 6lgl klónban a gshI transzgén expressziója extrém magas értéket mutatott (13,5-szeres) a 11ggs (1,0) klónhoz képest, amely érték tovább növekedett a DHAC demetilációs indukciójával (10-4 M, 7 napi kezelés) 6lgl klónban (180%). Ez a magas expressziós érték egy 60%-kal alacsonyabb kópiaszámú transzgén-beépülés (1,0-6lgl) ellenére érvényesült (1,6-11ggs). A DHAC-indukció a nyár endogén gsh1-génexpressziós szintjére szignifikánsan hatékonyabb volt a nem-transzformált (X) klónban (19,7-szeres), mint a transzformáns klónokban (6lgl-8,7-szeres; 11ggs-2,5-szeres)

    Similar works