Tumorspecifikus ellenanyagfragmens tisztítási és tesztelési eljárásainak kidolgozása a diagnosztikus alkalmazhatóság céljából = Development of purification and test procedures of tumorspecific immunoglobulin fragments for their further diagnostic use

Abstract

A szolid tumorokban fellelhető B sejtek kiaknázása volt a cél. A tumort infiltráló B sejtek (TIL-B) tumorspecifikus antigénkötő kapacitását nemzetközileg is elsőként igazoltuk. Az eljárás diagnosztikus célú tumorfelismerő "jelölő molekulákat" eredményez. A tématervi munka sokrétű volt: 1/Új molekuláris biológiai és biotechnológiai módszerek, 2/ preparatív fehérjetisztítási munkák, 3/ összehasonlító DNS elemzések, 4/ különböző ellenanyag - antigén kötődési tesztek, 5/ immun hiszto- és citokémiai jelölési technikák történtek. Eredményeink a célkitűzéseknek megfelelőek. A medulláris emlőkarcinómából nyert egyláncú ellenanyag fragmens tisztítása sikerült. Tumorsejtkultúra lemezek és fagyasztott tumorszövet metszetek a reagensünkkel pozitív reakciót adtak immunfluoreszcencs tesztben konfokális mikroszkópos értékeléssel. Melanomák, kolorektális karcinomák és több emlőtumor típus paraffinos metszetein immunhisztokémiai eljárással is pozitív reakciót kaptunk az új GD3 gangliozid ellenanyaggal. A TIL-B immunglobulin fág megjelenítéses módszer lehetővé tette további érdekes immunglobulin variábilis régiók szelektálását invaziv ductalis emlőcarcinomákban és melanomákban. GD3 gangliozid specifikus ellenanyag fragmensünk a tumorprogresszió és invázió szempontjából fontos struktúrákat szelektíven és megfelelően jelölte a tumorszöveti mintákon. Ezen szialilált glikoszfingolipidek differenciál diagnosztikus értékét alapozta meg a munka, lehetőséget nyitva mikrometastazisok kimutatására is. | We aimed to reveal the capacity of B cells present in small amounts in solid tumors. We were internationally the first to prove the characteristic tumorspecific binding capacity of tumor infiltrating B cells (TIL-B). Our startegy helps to develop novel diagnostic tumor recognizing "labelling arrow molecules". The project work consisted of: 1/ Novel molecular biological and biotechnological techniques, 2/ preparative protein purification processes, 3/ comparative DNA analyses, 4/ different antibody ? antigen binding assays, 5/ immunohistochemical and immunocytochemical methods. The results correlated our specific aims. We could purify our medullary breast carcinoma originated antibody fragment. Tumor cell chamber slides and frozen tissue sections gave positive reactions with our reagent in immunofluorescence - confocal laser microscopy. On paraffin embedded tissue sections of melanomas, colorectal carcinomas and some other breast cancer types we got positive reaction with this unique GD3 ganglioside specific antibody. Due to our TIL-B immunglobulin phage display technique further antibody variable region genes were selected in invasive ductal breast carcinomas and melanomas. The GD3 ganglioside specific antibody labelled selectively the structures important for tumorprogression and invasion on tumor tissue specimens. The work supports the differential diagnostic value of these sialylated glycosphingolipides, opening a window towards the detection of tumor micrometastases