Differenciáció és apoptózis indukálta jelpályák kölcsönhatása korai mieloeritroid és eritroid sejtekben = Interaction of differentiation and apoptosis inducing signalling pathways in myeloerythroid and erythroid cells

Abstract

Munkánk során összefüggést találtunk az eritroid differenciáció és a növekedési útvonalak, elsősorban az ERK MAPK, aktivitásának csökkenésében. Igazoltuk, hogy az ERK aktivitás csökkenése az eritroid differenciáció kezdeti szakaszában játszik szerepet, de nem elegendő a terminális differenciációhoz. ELM1 és TF1 sejteken kimutattuk, hogy a sejt ugyanarra stimulusra adott válaszát az ERK aktivitás időbeli lefutása döntően befolyásolhatja. K562 sejteken igazoltuk, hogy a Bcr/Abl jelpálya gátlása a sejtek hemoglobin termelésének növekedéséhez vezet. K562 és leukémiás betegekből származó sejteken bizonyítottuk, hogy a növekedési jelpálya egyidejű, több irányból történő támadása kedvező proapoptótikus hatást eredményez. Ezek az eredmények hozzájárulhatnak egyedi terápiák kidolgozásához. A431 sejteken kimutattuk, hogy az ABCG2 multidrog rezisztencia fehérje kifejeződése jelentős mértékben csökkenti a klinikumban alkalmazott TK gátló Iressa hatását. Összefüggést találtunk az ERK, p38 kinázok aktivitásainak mértéke, időbeli lefutása és az isoproterenol stimulus immunmoduláló hatása között. Beállítottunk egy új vizsgálati rendszert, mely fontos információkkal szolgálhat az új TK gátlók anti-tumor hatásának megítélésében. Résztvettünk új analitikai módszerek kidolgozásában. A külső sejt kontrollon alapuló mennyiségi mRNS meghatározási módszer szabadalmi bejelentéshez vezetett. Az új, nagy érzékenységű HPLC-MS módszer lehetővé teszi a sejten belüli TK gátlószerek direkt meghatározását. | We found a correlation between erythroid differentiation and a decrease in the activity of mitogen, especially of the ERK MAPK, pathways. We showed that a decrease in ERK activity was connected with the initiation steps of erythroid differentiation, but was not sufficient to induce terminal differentiation. We showed that the response of the cells was highly influenced by the kinetic of ERK activation. In K562 cells we found that the decrease of the Bcr/Abl kinase activity induced haemoglobin production. In K562 and in patient-originated primer cells, we demonstrated that the simultaneous action of different drugs along the mitogen pathway can have more favorable cytotoxic properties than those of individual drugs. All these results may serve as background for individual therapies. Strongly decreased cytotoxic efficiency could be observed in ABCG2 expressing A431 cells treated with Iressa. A strong correlation was found between the kinetic of ERK and p38 MAPK-s activation and the immuno-stimulating effect of beta-receptor activation by isoproterenol. We also participated in developing new analytical methods. A patent application has been filed covering our external control based quantitative mRNS detection. A new HPLC-MS based quantitative method has been developed for the detection of TKIs in the cells. Moreover we introduced a proper combination of in vitro assays that may provide valuable preclinical information for the targeted anticancer applicability of novel TKIs