Célunk annak felderítése volt, hogy a protein kináz C a HGF jelpályában milyen mechanizmus segítségével képes gátolni a foszfatidilinozitol 3-kináz aktivitását. Megállapítottuk, hogy a PKCalfa (de a PKCepszilon nem), foszforilálja a p110alfa/p85 PI 3-kináz katalitikus alegységét és ezzel csökkenti a PI 3-kináz katalitikus aktivitását. A HepG2 sejtek HGF-fel indukált szóródása során ez a folyamat lehet felelős a PI 3-kináz aktiválódás időtartamának csökkentéséért és így a PI 3-kináz-dependens migráció negatív szabályozásáért. A HepG2 sejtek forbol észter hatására történő migrációja viszont nem a PI 3-kináz-dependens, Rac aktiválást igénylő jelpálya segítségével indukálódik, hanem egy alternatív mechanizmussal. Ezt jellemzi a cortactin intenzív transzlokációja a plazmamembránhoz, amely jelenség HGF hatására nem figyelhető meg. In vitro kísérletekben a PKC foszforilálta a p110béta/p85 PI 3-kináz katalitikus alegységét is, de ez a foszforiláció nem csökkentette a PI 3-kináz katalitikus aktivitását. Megállapítottuk, hogy a p110béta/p85 PI 3-kináz katalitikus alegységének foszforilációja végbemegy a HepG2 sejtekben is. Ezt a hepatoma sejtekre specifikusnak látszó foszforilációt azonban, sejten belül nem a PKC végzi, hanem cAMP hatására stimulálódik. Feltételezhető, hogy ez a folyamat a májban, az inzulin jelpálya negatív szabályozásában játszik szerepet. Ennek bizonyítására még folytatódnak a kísérletek. | Our aim was to reveal the mechanism used by protein kinase C to inhibit the activity of phosphatidylinositol 3-kinase in the signalling system of HGF. We found that PKC?alpha(but not PKCepsilon) decreased the catalytic activity of the p110alpha/p85 PI 3-kinase by the phosphorylation of the catalytic subunit. This process can decrease the duration of the HGF-induced PI 3-kinase activation in HepG2 cells and in this way it can be responsible for the negative regulation of the migration. Contrarily, the phorbol ester-stimulated migration of HepG2 cells was found to be due to a Rac-independent mechanism and did not require the activation of PI 3-kinase. This alternative mechanism was characterised by the intensive translocation of cortactin to the plasma membrane, which was not detectable in HGF-induced cells. In vitro PKC was able to phosphorylate the catalytic subunit of the p110beta/p85 PI 3-kinase, as well, but this did not decrease the catalytic activity of PI 3-kinase. Nevertheless, we found that the phosphorylation of the catalytic subunit of the p110beta/p85 PI 3-kinase occurred in HepG2 cells. However, the intracellular phosphorylation of the catalytic subunit of p110?/p85 PI 3-kinase was not catalysed by PKC but was stimulated by cAMP and seemed to be a cell-specific process. It is conceivable that this phosphorylation plays some role in the negative regulation of the insulin signalling in the liver. This presumption requires further investigations
