Autoimmun betegségekben szerepet játszó új, diagnosztikus epitópok, valamint Fc receptorhoz kötődő és effektor funkciót kiváltó IgG Fc peptidkimérák azonosítása, szintézise és funkcionális jellemzése = Identification, synthesis and functional characterisation of new, diagnostic epitopes in autoimmune diseases, and of IgG Fc peptide chimeras binding to Fc receptor and triggering effector function

Abstract

Autoimmun hólyagos bőrbetegségekre jellemző B- és T-sejt epitóppeptideket szintetizáltunk szilárdfázisú peptidszintézissel, Fmoc/tBu stratégiával. A peptideket tisztítottuk, azonosítottuk. Autoantigén B-sejt epitópok azonosítására módosított ELISA módszerrel tűhegyen korábban szintetizált átlapoló desmoglein 1 és 3 peptideken hat pemphigus foliaceusban (PF), egy pemphigus vulgarisban (PV) szenvedő beteg és egészséges donor szérumát vizsgáltuk. Megállapítottuk, hogy az egészséges kontrollhoz képest a betegszérumok desmoglein specifikus autoellenanyag-tartalma általában kicsit magasabb, ezen belül öt olyan epitóprégiót találtunk, amelyeket hét beteg közül legalább öt szérum-ellenanyagai szignifikánsan erősebben ismertek fel. Megkezdtük ezen epitóprégiók szintézisét egyedi peptidek formájában, Cys-nel meghosszabbítva, későbbi, makromolekulás hordozóhoz vagy funkcionalizált ELISA lemezhez való konjugálás céljából. Desmoglein 3 autoantigén T-sejt epitóp vizsgálata pemphigus vulgarisban Két PV-ben szenvedő és két egészséges donor perifériás vér monomorfonukleáris sejtjeit (PBMC) izoláltuk, majd egy desmoglein 3 T-sejt epitóppeptid rövidített, átlapoló változataival inkubáltuk. A sejtek felülúszóiból szendvics ELISÁ-val mutattuk ki a termelődött interferon-gammát. A betegek PBMC-i szignifikánsan nagyobb mértékben termeltek IFN-gamma citokint, mint az egészséges donorok sejtjei. Leghatékonyabban a T-sejt epitóppeptid középső szakasza stimulálta a sejteket. | B- and T-cell epitope peptides characteristic for autoimmune bullous skin diseases were prepared by solid phase synthesis, Fmoc/tBu strategy. The peptides were purified and characterised. To determine autoantigenic B-cell epitopes, modified ELISA was performed on formerly synthesised pin-bound desmoglein 1 and 3 peptides with the sera of six pemphigus foliaceus (PF), a pemphigus vulgaris (PV) patients and healthy donor. The serum autoantibody binding to the peptides was generally somewhat higher in case of the patients, and we could identify five epitope regions which were recognised by at least 5 out of 7 patients significantly more strongly by patients’ sera than by those of the control. We have started the synthesis of the selected regions as individual peptides, elongated by Cys, to facilitate future conjugation to ELISA plates or macromolecular carriers. To study a desmoglein 3 autoantigen T-cell epitope in PV, we have isolated the PBMC of two PV patients and two healthy donors. The cells were incubated with truncated overlapping derivatives of T-cell epitope peptide. Interferon gamma cytokine produced by the cells was determined from the supernatants by sandwich ELISA. PBMC of patients produce