Killer toxin from the yeast Saccharomyces cerevisiae : purification and properties

Abstract

Note:Killer toxin from killer strains of Saccharomyces cerevisiae has been isolated from concentrates of extracellular medium by precipitation in polyethylene glycol and chromatography throughGlyceryl-controlled-pore glass in 4 M urea. Upon sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis the toxin exhibited a single band of protein with molecular weight of 11.000. Gel filtration indicated that the monomer protein vas the active unit. Amino acid analysis has been performed and indicated a molecular weight of 11 470. In the absence of dissociating conditions, toxin co-purified with mannan-protein. Two fractions containing aggregates of toxin and mannan protein have been purified. The mannan-protein components, 93% carbohydrate, were polydisperse with Mw - 200 000 and 370 000. The presence of concanavalin A during concentration of extracellular macromolecules inhibited the formation of aggregates containing active toxin. This implicated mannan in the binding of toxin.La toxine des souches 'killer' de Saccharomyces cerevisiae a été purifiée du médium extracellulaire par concentration, précipitation en présence de polyéthylène glycol, et chromatographie sur colonne de GLY-CPGl20 en présence de 4 M d'urée. D'après l'électrophorèse sur gel dodécyl sulfate de sodium (SDS), l'échantillon purifié semblait homogène. La bande protéique avait une mobilité correspondante à celle d'un polypeptide de 11 000 de poids moléculaire. D'après la filtration sur Sépharose CL-6B, la toxine agissante était une protéine monomère. La valeur du poids moléculaire évaluée par analyse chimique était 11 470. Dans les conditions de non dissociation, la toxine a été purifiée en même temps que mannoprotéine. Deux fractions qui contenaient des agrégats de la toxine et de la mannoprotéine ont été purifiées. Les mannoprotéines étaient à 93% d’hydrate de carbone, et avaient des poids moléculaire moyens (M ) de 200 000 et de 370 000. La présence de la concanavali A pendant la concentration des macromolécules extracellulaires a empêché la formation d'agrégats contenant la toxine active. Ceci suggère que la portion mannan était le site de liaison de la toxine