The Authors report on the results of researches about a serious soft rot of greenhouse tomato fruits in

southern Sardinia (Italy).

The disease symptoms and the characteristics of the causal agent, identified by its morphological and

cultural characters, and by biochemical and serological lests, as Pseudomonas viridiflava (Burkholder)

Dowson, are described

Carta, Carmela

Fiori, Mario

Franceschini, Antonio

Italian

UnissResearch

ANNAbI 
DELLA FACOLTA' DI AGRARIA DELL' UNIVERSITA' 
______ SASSARI _____ _ 
studi sassaresl 
Sczione III 1982 Volumc XXIX 
ANNAbI 
DELLA FACOLTA' DI AGRARIA DELL' UNIVERSITA' 
SASSARI 
DIRETTORE: G. RIVOIRA 
COMITATO DI REDAZIONE: M. DATTILO· S. DE MONTIS . F. FATICHENTI 
C. GESSA· L. lODA - F. MARRAS· A .. ~flLELLA· P. PICCA ROLO - A. PIETRACAPRINA 
R.PROTA·G.TORRE-A.VODRET 
studi saeaaresi 
ORGA~O t:FFICIALE 
DELLA SOCIETA SASSARESE DI SCIE~ZE MEDICHE E ~ATURALI 
RIASSUNTO 
Istituto di Patologia vegetale dell'Università di Sassari 
(Direttore: Prot. F. Marras) 
M. FIORI· C. CARTA· A. FRANCESCHINI 
IL «MARCIUME MOLLE)) DEI FRUTTI DI POMODORO 
DA PSEUOOMONAS V/RIO/FLAVA (BURKHOLDER) DOWSON" 
Si riferisce sui risultati di osservazioni e ricerche su un grave .. marciume molle .. che colpisce i frutti di po-
modoro nelle serre fredde della Sardegna meridionale. 
Vengono descritti la malattia ed il patogeno che, in base ai caratteri morfologici, colturali, biochimici e 
sierologlcl, è stato identificato con Pseudomonas viridiflava (Burkholder) Dowson. 
SUMMARY 
The soft rot o, tomato by Pseudomonas v/ridlllava (Burkholder) Dowson. 
The Authors report on the results of researches about a serious soft rot of greenhouse tomato fruits in 
southern Sardlnia (ltaly). 
The dlsease symptoms and the characteristics of the causai agent, identified by its morphological and 
cultural characters, and by biochemical and serological lests, as Pseudomonas viridiflava (Burkholder) 
Dowson, are described. 
L'espandersi in questi ultimi anni del pomodoro in coltura protetta, peraltro molte 
volte in un ambiente non certo ottimale soprattutto per l'insufficiente apporto 
calorico, dati gli elevati costi energetici, e il conseguente eccessivo grado di umi-
dità - nonché l'impiego di nuove cultivar ed ibridi per soddisfare meglio le esi-
genze del mercato, hanno esaltato l'aggressività di parassiti che nel passato, in 
condizioni meno favorevoli, non esplicavano tutta la loro potenzialità patogena. 
Ed è appunto in quest'ottica che va visto l'insorgere ed il diffondersi in forma gra-
ve, specialmente nelle serre a copertura in polietilene della Sardegna meridionale, 
di un ((marciume molle)) batterico dei frutti di pomodoro. 
• lavoro eseguito con il contributo finanziario del M.P.1. 
442 
Dalla letteratura fitopatologica risulta che il «marciume molle» dei frutti di pomo-
doro può essere indotto oltre che, comunemente, dai batteri coliformi pectolitici 
(cfr., tra gli altri, WINGARD, 1924; RAINIO, 1932; BARTZ e CRILL, 1972; BATSON, 
1973; JONES e Mc CARTER, 1974; BARZIC et al., 1976) anche da specie di Pseudo-
monas: P. marginalis (Brown) Stevens, P. viridilivida (Brown) Bergey et al., 
(BROWN, 1926 rispett. sub Bacterium marginale Brown e Bact. viridilividum 
Brown), P. syringae Van Hall (BROWN, I.c. sub Bact. savastanoi Smith; VOLCANI, 
1954), P. syringae pv. capsici (ARSENIJEVIC e RADUSIN, 1981); di Xanthomonas: 
X. malvacearum (Smith) Dowson (BROWN, I.c. sub Bact. malvacearum Smith), X. 
Lycopersici varo vitiati Strzalk. (STRZALKOWSKA, 1930 sub BacI. Iycopersici vitiati 
Strzalk.; ABD-EL-REHIM, 1965); e da Agrobaclerium tume!aciens (Smith et Town-
send) Conn (BROWN, I.c. sub Bact. tume!aciens Smith et Townsend), Bacillus !ru-
todestruens Madhok et Ud-Din (MADHOK e UD-DIN, 1943) e Bacillus subtilis (Eh-
renberg) Cohn (VOLCANI e WAHL, 1954). 
Per quanto riguarda l'Italia, a quel che ci consta, non sono mai stati segnalati bat-
teri agenti di ((marciumi molli» di frutti di pomodoro né in coltura protetta né in 
pieno campo. Pertanto, abbiamo creduto opportuno occuparci da vicino della ma-
lattia e del batterio responsabile. In questa nota riferiamo appunto i risultati delle 
nostre ricerche. 
CARATTERI GENERALI DELLA MALATIIA SINTOMATOLOGIA 
La malattia è stata riscontrata nelle colture invernali degli ibridi «Flamingo» e 
«Fandango)), soprattutto, come già detto, nelle serre fredde con copertura di polie-
tilene nelle quali si interviene con apporti calorici di soccorso. Essa compare 
all'inizio della raccolta e colpisce esclusivamente le bacche, tanto quelle ancora 
verdi come quelle già invaiate. 
L'affezione è caratterizzata dalla presenza sulla superficie del frutto, di solito in 
corrispondenza dell'estremità stilare, di una macchia necrotica di colore marrone 
scuro, leggermente depressa e con alone traslucido, di forma piu o meno tondeg-
giante e di dimensioni variabili a seconda dello stadio dell'infezione. 
L'imbrunimento interessa anche, e soprattutto, i tessuti interni sottostanti sino al-
le logge. A mano a mano che l'infezione si estende il frutto diviene sempre meno 
consistente ed infine marcisce. 
Le osservazioni al microscopio di frammenti di tessuto imbrunito mostrano la pre-
senza di numerosi batteri mobili. 
443 
1 2 
3 4 
Il "marciume molle" dei frutti di pomodoro da Pseudomonas vlriddlav8: infezioni naturali (Flgg , . 2) e arti ' 
flclali (Flgg. 3-4) . 
Symptoms ot ~soft rot .. by Pseudomonas vmdlflava on tomato frults naturally (Flgs. ' ·2) and artl(lc lally 
(Flgs . 3·4) infected. 
ISOLAMENTO DEL PATOGENO - PROVE DI PATOGENICITÀ 
Sospensioni in acqua sterile di frammenti di tessuto infetto sono state strisciate, 
direttamente o mediante opportuna diluizione, su piastre di agar nutritivo. Dopo 
48 ore di incubazione a 25 Q C si sviluppavano colonie batteriche trasparenti ) bian· 
castre, di consistenza viscida, piatte, circolari con margine dentato e diametro da 
2 a 3 mm. 
444 
La patogenicità degli isolati è stata saggiata su bacche di «Flamingo" e ((Fandan-
go» ancora verdi e all'inizio dell'invaiatura. 
La tecnica dell'inoculazione consisteva nel ferire con un ago sterile le bacche in 
prossimità dello stilo e nel contaminare le ferite con una goccia di sospensione 
batterica (10' celI/mi) ottenuta da strisci di 24 ore su agar nutritivo. I controlli sono 
stati inoculati con acqua sterile. Ad ultimo le bacche sono state poste sotto cam-
pana di vetro e tenute a temperatura ambiente. A quattro giorni dall'inoculazione 
tutte le bacche infettate manifestavano sintomi del tutto simili a quelli riscontrati 
in natura. I caratteri del batterio reisolato erano identici a quelli dell'isolato da 
bacche naturalmente infette. 
IDENTIFICAZIONE DEL PATOGENO 
Caratteri morf%gic; e colturali 
I batteri, allevati a 25° C per 24 ore su agar nutritivo, si presentano a forma di ba-
stoncello diritto, di dimensioni 1,2 - 2,7 x 0,43-0,65 l'm, singoli o accoppiati, Gram 
negativi, aerobi e mobili per la presenza di 2-3 'flagelli polari. 
Su brodo nutritivo semplice essi mostrano un buon accrescimento e torbidità 
omogenea dopo 48 ore a 25° C. Su agar nutritivo glucosato, dopo 48 ore a 25° C, 
le colonie sono di forma circolare con diametro di 1,5-2 mm e margine dentato, di 
colore bianco giallino, traslucide, rilevate, a superficie liscia e consistenza visci-
da. Su agar nutritivo al 5% di saccarosio, dopo tre giorni, si formano colonie mu-
coidi, convesse, biancastre con centro verde, levano negative; dopo sette giorni 
esse assomigliano a colonie levaniformi. Su YDC-agar (glucosio 2%; Yeast Ex-
tract 1 %; CaCOl 2%; agar 1,5%) le colonie producono dopo 48 ore un pigmento 
verdastro che col tempo diviene marrone scuro. 
Il batterio cresce a 4 ° C ma non a 37° C; l'optimum è compreso tra 25 e 27° C. 
Attività fisiologiche e biochimiche 
I batteri sono ossidasi negativi (KOVACS, 1956) e catalasi positivi; sul substrato 
«8" di KING et al. (1954) producono un pigmento fluorescente visibile alla luce ul-
travioletta; provocano entro 24 ore la reazione di ipersensibilità su tabacco «(White 
Burley» (sec. KLEMENT, 1963); non liquefanno il gel pectico (PATON, 1959) e cau-
sano, entro 48 ore, la marcescenza completa dei tasselli di patata in vitro; lique-
fanno la gelatina dopo sei giorni in infissioni a 22° C; non riducono i nitrati e non 
producono alcali dall'arginina (THORNLEY, 1960); non producono 
2-chetogluconato (LELLIOn et al., 1966); idrolizzano la caseina, la tirosina, l'escu-
445 
lina, l'urea (CHRISTENSEN, 1946) e il Tween 80 (SIERRA, 1957) ma non l'amido; 
non producono indolo da triptofano né acido solfidrico da cisteina; alcalinizzano e 
peptonizzano il latte tornasolato entro dieci giorni. Nel terreno di Simmon utilizza-
no dopo quattro giorni acetato, citrato, formiato, lattato, malato e succinato di so-
dio ma non ossalato e tartrato. Crescono bene su brodo nutritivo contenente il 
2% di NaCI ma debolmente quando la concentrazione del sale viene portata al 
5%; metabolizzano il glucosio in maniera ossidativa (HUGH e LEIFSON, 1953). 
Producono acido senza\!Uls da arabinosio, fucosio, galattosio, glicerina, glucosio, 
mannosio e xilosio ma non da cellobiosio, lattosio, maltosio, ramnosio, saccaro-
sio, salicina e trealosio (AYERS et al., 1919). I dati relativi a tali saggi diagnostici 
sono riportati nella tabella 1. 
I risultati ottenuti indicano che il nostro isolato, sia per i caratteri principali (LO-
PAT) come per quelli sussidiari, va collocato senz'altro nel gruppo Il dello schema 
determinativo di LELLIOTT et al. (I.c.) e che è assimilabile a P. viridiflava (Burkhol-
der) Dowson. Tra l'altro, nei saggi slerologici effettuati con i metodi della precipi-
tazione in provetta e della doppia diffusione in agar, l'antisiero al nostro isolato 
(titolo: 2048) ha reagito positivamente con 3 isolati di P. viridiflava: NCPPB' 1250 
da prezzemolo, NCPPB 1382 da pomodoro ed NCPPB 1810 da fagiolo nano. 
Dalla letteratura fitopatologica risulta che su pomodoro P. viridiflava è stata ri-
scontrata per la prima volta in Kenia da ROBINSON (cfr. BILLlNG, 1970). Successi-
vamente essa è stata reperita in Nuova Zelanda quale agente di un «marciume del 
fusto" in colture di pieno campo (WILKIE et al., 1973) e, più recentemente, in Giap-
pone su foglie, fusti e sepali (NISHIYAMA et al., 1979). Sembrerebbe pertanto che 
il nostro sia il primo reperto di P. viridiflava quale agente di un «marciume molle .. 
di frutti di pomodoro in natura. 
I NCPPB = Natlonal Collection Plant Pathogenic Bacteria. Harpenden (U.K.). 
446 
Tab. 1 Risultati del principali saggi diagnostici 
Results of maln dlagnostic tests 
Saggi Periodo di osservazione in giorni 
2 3 4 5 6 7 15 
Produzione di levano 
Fluorescenza su KB + + 
-Produzione di ossidasi 
Marciume patata + + 
Arginina deidrolasi 
Ipersensibilltà su tabacco + 
Produzione di 2·chetogluconato 
Riduzione del nitrati 
Metabolismo del glucosio: 
fermentativo 
ossidatlvo ± ± + + + + + 
Idrolisi: gelatina + + 
esculina + 
tirosina + 
amido 
pectato 
caseina + 
urea ± + + + + + 
Produzione di: indolo 
H2S 
Upolisi del Tween 80 + 
Utilizzazione di: acetato ± ± + 
citrato ± ± + 
formiato ± ± + 
lattato ± ± + 
malato ± ± + 
succinato ± ± + 
ossalato 
tartrato 
Acidità da: arabinosio + + + + + 
fucosio + + + + + 
galattosio + + + + 
glicerina + + + + + + 
glucosio + + + + + 
mannosio + + + + + + 
xilosio + + + + + + + 
cellobiosio 
lattosio 
maltosio 
ramnosio 
saccarosio 
salìcina 
trealoslo 
Reazione positiva +; Reazione debolmente positiva ±; Reazione negativa -. 
447 
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Il «Marciume molle» dei frutti di pomodoro da <i>Pseudomonas virdiflava</i> (Burkholder) Dowson

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