Nearly all old line citrus trees growing in Sardinia (Italy) are infected by citrus exocortis

viroid (CEV).

The technique of shoot-tip grafting has proved effective in recovering various citrus cultivars

free of this viroid

Corda, Pietro Maria

Foddai, Antonio

Idini, G.

Italian

UnissResearch

ANNAbI 
DELLA FACOLTA' DI AGRARIA DELL' UNIVERSITA' 
______ SASSARI _____ _ 
studi sass resi 
Sezione III 1980 - 81 Volume XXV'III 
ANNAbI 
DELLA FACOLTA' DI AGRARIA DELL' UNIVERSITA' 
SASSARI 
DIRETTORE: G. RIVOIRA 
COMITATO DI REDAZIONE: M. DATTILO - F. FATICHENTI - C. GESSA - L. IDDA 
F. MARRAS - A. MILELLA - P. PICCAROLO - A. PIETRACAPRINA - R. PROTA 
R. SATTA - G. TORRE - A. VODRET 
ORGANO UFFICIALE 
DELLA SOCIETÀ SASSARESE DI SCIENZE MEDICHE E NATURALI 
GALLIZZI . SASSARI· 1982 
Istituto di Patologia vegetale dell'Università di Sassari 
(Direttore: Prof. F. Marras) 
A. FODDAI, P. CORDA, G. IDINI 
IL RISANAMENTO DEGLI AGRUMI DAL VIROIDE DELL'EXOCORTITE 
MEDIANTE IL MICROINNESTO * 
E' già da molti anni che questo Istituto ha messo in evidenza come in Sardegna 
siano presenti tutte le principali malattie da virus degli Agrumi (SERVAZZI et al., 
1973). Tra queste, l'Exocortite merita indubbiamente un'attenzione particolare. 
Ed infatti, tutte le numerose piante di Agrumi di vecchio clone (C( old line ») da 
noi esaminate sono risultate infette dal viroide responsabile della malattia. Per 
fortuna, essa non si rende manifesta grazie al fatto che il portinnesto impiegato 
nell'Isola - come d'altronde nel resto ,d'Italia e nella maggioranza dei Paesi 
agrumicoli del Mediterraneo - è quasi esclusivamente l'Arancio amaro, tolle-
rante. Senonché, -il dilagare del virus della Tristezza, cui questo portinnesto è 
notoriamente molto sensibile, in alcuni Paesi del Mediterraneo, in particolare 
nella vìcina Spagna - nel 1972 risultavano colpiti ben 82.000 ha di Agrumi 
(GUARDIOLA, 1974) - è motivo di non poche apprensioni per il costante peri-
colo di 'contaminazione cui sono esposti i nostri agrumeti. Nella malaugurata 
eventualità che si scatenasse anche in Italia un'improwisa epidemia di Tristezza 
e, di conseguenza, si rendesse 'indispensabile la sostituzione dell'Arancio amaro 
con altri portinnesti, sarebbe proprio ,il problema dell'Exocortite ad affiorare in 
tutta la 'sua gravità. 
E' stato soprattutto questo il motivo che ci ha indotto, da tempo, ad occuparci 
della selezione sanitaria degli Agrumi. Diciamo subito che, di proposito, non si 
è voluto far ricorso alla termoterapia - che pure ha avuto un certo successo 
nel risanamentodi piante infette ,da 'alcuni importanti virus (Tristezza, Psorosi A, 
C( Concave gum )), C( Infectious variegation ))) - proprio perché nei confronti 
* Lavoro eseguito con un contributo finanziario del C.N.R. 
Ha collaborato alle ricerche Speranza Migheli. Operatore T.P. del C.N.A. 
del viroide dell'Exocortite ha dato ripetutamente risultati negativi (ROSSETII 
et al., 1965; CATARA et al., 1968; CALAVAN et al .. 1972). Abbiamo invece se-
guito. ,in un primo momento, la via delfa selezione nucellare (SERVAZZI et al., 
l.c., 1973). Tuttavia, anche questa tecnica ha dimostrato, com'è ben noto, 
limiti piuttosto notevoli. Intanto non è semplice applicarla ai tipi di agrumi 
monoembrionici o privi di semi. E poi, in ogni caso, le pianti ne nucellari, pur 
avendo lo stesso genotipo delle piante madri, sono purtroppo ,caratterizzate 
dall'insorgenza di caratteri cc giovanili» molto accentuati che tendono ad atte-
nuarsi solamente con l'età della pianta e, soprattutto, dopo reiterate propagazioni 
vegetati ve mediante innesto. Ne deriva che per disporre di discendenze nucellari 
adatte alla propagazione occorrono parecchi anni, non meno di 12-15. 
Proprio per ovviare a questi inconvenienti, si è ritenuto necessario ricorrere 
alla più recente tecnica del microinnesto messa a punto da ricercatori cali-
forniani e spagnoli (cfr., tra gli altri, MURASHIGE et al., 1972; BITTERS et al., 
1972; NAVARRO, 1975; NAVARRO et al., 1975). Per quanto riguarda l'Italia, 
questa tecnica è stata già impiegata (RUSSO e STARRANTINO, 1973; TUSA 
et al., 1979) ma, a quel che ci consta, non è stato ancora fornito alcun dato 
circa il risanamento da infezioni virali delle pianti ne ottenute. 
MATERIALI E METODI 
La metodica seguita per il microinnesto non si discosta sostanzialmente da quella 
descritta da NAVARRO et al., (Lc., 1975). 
Portinnesti - E' stato impiegato il Citrange «Troyer» i cui germogli, grazie al 
carattere «trifogliato n, differiscono nettamente da quelli degli apici microinne-
stati e sono quindi agevolmente asportabili. 
I semi, liberati dal tegumento e opportunamente sterilizzati, sono stati posti a 
germinare in tubi di coltura contenenti terreno nutritivo agarizzato a pH 5,7. 
I tubi sono stati tenuti costantemente al buio a 27" C. 
Germogli - Sono stati prelevati da piante di pieno campo, innestate su Arancio 
amaro, di Arancio dolce (<< Belladonna", «Moro", «Tarocco» e «Washington 
Navel »l. Mandarino cc Avana", Clementine «Comune », Pompelmo cc Marsh» e 
Limone (<< Lisbon" e « Rifiorente »). Tutte le piante erano ovviamente infette 
dal viroide del'Exocortite. 
Microinnesto - Dopo 2 settimane dalla semina, i semenzali di Citrange cc Troyer Il 
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sono stati capitozzati e sul fusticino è stata praticata un'incisione della cor-
teccia a forma di T rovesciata. 
Contemporaneamente, al microscopio binoculare a 40 x e con l'ausilio di 
idonei strumenti di dissezione, dai germogli delle piante da risanare, accurata-
mente disinfettati, sono stati excisi gli apici, di dimensioni inferiori a 0,5 mm, 
costituiti dalla cupola meristematica e dal primo paio di abbozzi fogliari. 
In -corrispondenza dell'incisione praticata sul semenzale, i lembi della corteccia 
venivano sollevati e al disotto si inseriva l'apice del germoglio con la super-
ficie basale a contatto con la regione cambiale del portinnesto. 
I semenzali così innestati sono stati -allevati in tubi di coltura contenenti terreno 
nutritivo liquido a pH 5,7 e mantenuti in cella climatica a 27° C, con un'umidità 
relativa del 70-80%, un fotoperiodo giornaliero di 16 ore ed un'intensità luminosa 
intorno a 2.000 lux. Essi venivano controllati periodicamente al fine di asportare 
i germogli emessi dal portinnesto. 
Le pianti ne bimembri, allo stadio di 3-4 foglioline, sono state trasferite in va-
setti contenenti un terriccio idoneo ed allevate in serra sino al momento del 
saggio biologico. Questo è stato eseguito in serra calda (270 C) impiegando. 
come « indicatrice », il Cedro tt Etrog » Arizona 861, secondo le modalità da noi 
precedentemente descritte (SERVAZZI et al., 1964). 
Tutte le operazioni di inoculo e quelle successive di potatura sono state effet-
tuate con coltelli e forbici accuratamente disinfettati con ipoclorito di sodio 
all'1 % (ROISTACHER et al., 1969; GARNSEY e WEATHERS, 1972). 
RISULTATI E CONCLUSIONI 
Il numero di microinnesti eseguiti è stato diverso a seconda della specie e 
della cultivar. Comunque, la percentuale di attecchimento è stata, nel complesso, 
soddisfacente. Infatti, come si può rilevare dalla tabella n. 1, essa ha variato 
da un minimo del 25% per l'Arancio -dolce « Moro» ad un massimo del 60% 
per il Mandarino Cf Avana )) e il Limone « Lisbon ». 
Qualche giorno dopo il trasferimento in serra, diverse piantine, mostrando di 
risentire delle mutate condizioni climatiche, hanno cominciato a manifestare 
un graduale disseccamento delle foglioline e, lentamente, sono morte. 
Le piantine sopravvissute sono state complessivamente 75, e precisamente: 
n. 28 Aranci dolci (17 cc Belladonna », 4 cc Moro », 5 Ct Tarocco» e 2 W. Navel »), 
n. 11 Mandarini te Avana », n. 9 Clementine cc Comune », n. 7 Pompelmi « Marsh » 
e n. 20 Limoni (9 Cf Lisbon » e 11 «Rifiorente» l. Per il momento sono state già 
saggiate, in tempi diversi, 42 piantine: 14 Aranci dolci te Belladonna », 7 Cle-
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Tab. 1 Percentuale di microinnesti attecchiti. 
Specie e cultivar % 
Arancio dolce " Belladonna" 40,8 
Arancio dolce" Moro" 25,7 
Arancio dolce "Tarocco" 43,1 
Arancio dolce" W. Navel " 45,6 
Mandarino .. Avana" 60,4 
Clementine .. Comune" 40,3 
Pompelmo .. Marsh ,. 39,8 
Limone " Lisbon " 60.5 
limone .. Rifiorente " 49,6 
mentine « Comune », 5 Pompelmi " Marsh » e 16 Limoni (7 " Lisbon )I e 9 " Rifio-
rente »). Tutti i saggi hanno dato sinora, a distanza di un anno dall'ultima inocu-
lazione, esito negativo. 
Alla luce di questi risultati. e in accordo con quelli ottenuti altrove (cfr. 
MURASHIGE et al., I.'c., 1972; NAVARRO et al., I.c., 1975; ROISTACHER et al., 
1976; ROISTACHER e KITTO, 1977). riteniamo che anche per l'Italia la tecnica 
del microinnesto rappresenti oggigiorno il metodo più valido per costituire 
piante di Agrumi esenti dal viroide dell'Exocortite. 
RIASSUNTO 
Le piante di Agrumi di vecchio clone coltivate in Sardegna sono pressoché tutte infette, in forma 
latente, òal viroide dell'Exocortite. 
Con l'intento di ottenere materiale agrumicolo esente da detto viroide è stata applicata, con 
successo, la tecnica del microinnesto. 
SUMMARY 
Elimination of citrus exocortis viroid by shoot-tip grafting. 
Nearly ali o!d line citrus trees growing in Sardinia (Italy) are infected by citrus exocortis 
viroid (CEV). 
The technique of shoot-tip grafting has proved effective in recovering various citrus cultivars 
free of this viroid. 
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Il Risanamento degli agrumi dal viroide dell'Exocortite mediante il microinnesto

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