Kulit buah kakao terbukti mempunyai aktivitas antibakteri. Kulit buah kakao mengandung senyawa fenolik seperti kuersetin, resorsinol, flavonoid, dan tanin yang dapat dimanfaatkan sebagai agen antibakteri alami. Pelarut yang paling baik untuk mengekstraksi tanaman yang banyak mengandung komponen fenolik yaitu aseton. Tujuan penelitian ini yaitu menentukan aktivitas antibakteri ekstrak aseton kulit buah kakao segar dan menentukan kandungan senyawa yang

bertanggung jawab sebagai antibakteri. Kulit buah kakao segar diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan

pelarut aseton. Ekstrak diuji aktivitas antibakteri terhadap Streptococcus mutans dan Escherichia coli dengan metode difusi disk. Kandungan senyawa diuji dengan

KLT dan penentuan senyawa yang bertanggung jawab sebagai antibakteri diuji dengan bioautografi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak aseton kulit buah kakao mempunyai aktivitas antibakteri terhadap S. mutans mulai konsentrasi 1 mg/disk dengan diameter zona hambat 6,5±0,0 mm dan tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap E. coli. Berdasarkan uji KLT dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak kloroform : n-heksan (9:1) v/v, ekstrak aseton kulit buah kakao mengandung senyawa fenolik, flavonoid, saponin, dan alkaloid. Senyawa yang bertanggung jawab sebagai antibakteri terhadap S. mutans yaitu fenolik,

flavonoid, dan saponin

, Peni Indrayudha, Ph.D.,Apt

, Rima Munawaroh, M.Sc., Apt

Hidayati, Candra Dwi

Kulit buah kakao (Theobroma cacao L.) kaya akan kandungan fenolik seperti tannin, epikatekin-3-galat dan asam sinamat, terdapat juga alkaloid dan flavonoid yang dapat digunakan sebagai antibakteri, antioksidan, dan antiinflamasi. Fenolik merupakan senyawa polar yang dapat larut dengan penyari aseton. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri fraksi etanol-air ekstrak aseton kulit buah kakao terhadap S. mutans dan E. coli serta

mengetahui senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri.

Kulit buah kakao di ekstraksi dengan aseton secara maserasi dan dilakukan fraksinasi dengan metode partisi cair-cair menggunakan pelarut etanol-air dengan n-heksan dan etil asetat sehingga didapatkan fraksi etanol-air. Uji aktivitas

antibakteri menggunakan metode difusi disk dengan konsentrasi 3,0 mg/disk, 3,5 mg/disk, 4,0 mg/disk, 4,5 mg/disk dan 5,0 mg/disk. Selanjutnya dilakukan KLT

untuk identifikasi senyawa aktif, dengan fase diam silika GF 254 dan fase gerak metanol:air (3:7) v/v. Uji bioautografi dengan metode bioautografi kontak.

Hasil penelitian menunjukkan fraksi etanol-air ekstrak aseton kulit buah kakao hingga konsentrasi 5,0 mg/disk tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap E. coli, tetapi pada konsentrasi 3,5 mg/disk memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. mutans dengan zona hambat 6,58±0,1 mm. Hasil uji KLT dan hasil bioautografi fraksi etanol-air terhadap S. mutans menunjukkan golongan fenolik dan alkaloid yang memiliki aktivitas antibakteri

Irawati, Eka Septiana

UMS Digital Library - Selamat datang di UMS Digital Library

AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN BIOAUTOGRAFI FRAKSI ETANOL-AIR EKSTRAK ASETON KULIT BUAH KAKAO ( Theobroma cacao L. ) TERHADAP Streptococcus mutans DAN Escherichia coli  SKRIPSI    Oleh: EKA SEPTIANA IRAWATI K100 090 100       FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2013 ii AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN BIOUATOGRAFI FRAKSI ETANOL-AIR EKSTRAK ASETON KULIT BUAH KAKAO (Theobroma cacao L.) TERHADAP Streptococcus mutans DAN Escherichia coli   SKRIPSI  Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta di Surakarta     Oleh:  EKA SEPTIANA IRAWATI K100 090 100            FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2012 iii  iv        v  KATA PENGANTAR  Assalamu’alaikum Wr. Wb. Alhamdulillah, segala puji syukur hanya kepada Allah SWT yang selalu memberikan petunjuk dan kekuatan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Aktivitas Antibakteri dan Bioautografi Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao (Theobroma cacao L.) terhadap Streptococcus mutans dan Escherichia coli”. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Penulis dengan segala kerendahan hati mengucapkan terima kasih kepada: 1. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M. Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. 2. Bapak Peni Indrayudha, M. Biotech, Apt. dan Ibu Rima Munawaroh, M. Sc., Apt selaku dosen Pembimbing.   3. Bapak Dr. Muhtadi, M. Sc selaku penguji 1 dan Ibu Ika Trisharyanti D.K, M. Farm., Apt sebagai penguji 2. 4. Bapak dan Ibu dosen Fakultas Farmasi UMS. 5. Seluruh Staf dan laboran Fakultas Farmasi. 6. Kedua orang tua tercinta, Ibu Paimah dan Bapak Wijiyanto. 7. Adikku Adinda Dwi Aryanti Nur Hidayati. 8. Sahabat-sahabat yang tidak dapat penulis sebutkan semuanya. Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih banyak kekurangan, oleh karena itu kritik dan saran yang bersifat membangun sangat penulis harapkan. Semoga penelitian ini bermanfaat bagi pengembangan ilmu dalam bidang farmasi dan dunia kesehatan. Wassalamu'alaikum wr. wb.   Surakarta,     Februari  2013                                                                                                       Penulis vi  DAFTAR ISI Halaman HALAMAN SAMPUL DEPAN ............................................................. i HALAMAN SAMPUL DALAM ........................................................... ii HALAMAN PENGESAHAN ................................................................. iii HALAMAN DEKLARASI ..................................................................... iv KATA PENGANTAR ............................................................................ v DAFTAR ISI ........................................................................................... vi DAFTAR TABEL ................................................................................... ix DAFTAR GAMBAR .............................................................................. x DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................... xi DAFTAR SINGKATAN ........................................................................ xii INTISARI ................................................................................................ xiii BAB I  PENDAHULUAN .................................................................... 1 A. Latar Belakang Masalah ..................................................... 1 B. Perumusan Masalah ............................................................ 2 C. Tujuan Penelitian ................................................................ 2 D. Tinjauan Pustaka ................................................................. 3 1. Tanaman Kakao (Theobroma cacao L.) ....................... 3 2. Streptococcus mutans .................................................... 4 3. Escherichia coli ............................................................. 4 4. Antibakteri .................................................................... 5 5. Metode Ekstraksi dan Fraksinasi .................................. 5 6. Metode Difusi ............................................................... 6 7. Bioautografi .................................................................. 6 E. Landasan Teori ................................................................... 6 F. Hipotesis ............................................................................. 7 BAB II METODE PENELITIAN .......................................................... 8 A. Kategori Penelitian ............................................................. 8 B. Variabel Penelitian .............................................................. 8 vii  1. Variabel bebas ............................................................... 8 2. Variable tergantung ....................................................... 8 3. Variabel kendali ............................................................ 8 C. Bahan dan Alat .................................................................... 8 1. Bahan  ........................................................................... 8 2. Alat ................................................................................ 9 D. Tempat Penelitian ............................................................... 9 E. Jalannya Penelitian ............................................................. 10 a. Determinasi Tanaman ................................................... 10 b. Penyiapan Bahan ........................................................... 10 c. Ekstraksi ........................................................................ 10 d. Fraksinasi Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao ............... 10 e. Sterilisasi Alat dan Bahan ............................................. 10 f. Pembuatan Media .......................................................... 11 g. Pewarnaan Bakteri ........................................................ 12 h. Pembuatan Suspensi Bakteri ......................................... 12 i. Pembuatan Larutan Stok dan seri Konsentrasi ............. 12 j. Uji Antibakteri dengan Metode Difusi Agar ................. 12 k. KLT Fraksi Etanol-Air  ................................................. 13 l. Uji Aktivitas Antibakteri dengan Bioautografi ............. 14 F. Analisis Data ....................................................................... 14 BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................... 16 A. Determinasi Tanaman ......................................................... 16 B. Identifikasi Bakteri ............................................................. 16 C. Ekstraksi .............................................................................. 17 D. Fraksinasi Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao .................... 18 E. Uji Aktivitas Antibakteri .................................................... 18 F. Hasil Kromatografi Lapis Tipis .......................................... 21 G. Hasil Bioautografi ............................................................... 23 BAB IV KESIMPULAN DAN SARAN ................................................ 25 A. Kesimpulan ......................................................................... 25 viii  B. Saran ................................................................................... 25 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................. 26 LAMPIRAN  ....................................................................................... 29                    ix  DAFTAR TABEL  Tabel 1. Hasil Fraksinasi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao (Theobroma caca L.) ................................................................ 18 Tabel 2. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton kulit buah kakao (Theobroma cacao L.) terhadap Streptococcus mutans dan Escherichia coli ........................... 20 Tabel 3. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao (Theobroma cacao L.) fase gerak metanol:air (3:7) dengan jarak pengembangan 5 cm .............. 22               x  DAFTAR GAMBAR Gambar  1. Theobroma cacao L ............................................................. 3 Gambar 2. Pembuatan Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao untuk Uji Aktivitas Antibakteri ................................... 11 Gambar 3. Pembuatan Seri Konsentrasi Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao untuk Uji Aktivitas Antibakteri ...... 13 Gambar 4. Pengujian Aktivitas Antibakteri Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao dengan Metode Bioautografi ... 14 Gambar 5. Hasil Pengecatan Gram Bakteri Escherichia coli (A) dan Streptococcus mutans (B) .................................................. 16 Gambar 6. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao (Theobroma cacao L.) terhadap E.coli dan S.mutans ............................................. 20 Gambar 7. Hasil Kromatografi Lapis Tipis fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kaka .................................................... 22 Gambar 8. Hasil Bioautografi Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao terhadap S,mutans. ........................................ 24          xi  DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi ......................................... 29 Lampiran 2.   Perhitungan Randemen Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao dan Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao ............................................................................... 31 Lampiran 3.  Perhitungan Konsentrasi Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah kakao (Throbroma cacao L) ............. 32 Lampiran 4.  Hasil Uji Aktivitas Antibakteri ........................................ 33                xii  DAFTAR SINGKATAN  GF  : Gips Flourecense UV  : Ultraviolet KLT  : Kromatografi Lapis Tipis MH  :  Mueller Hinton BHI  :  Brain Heart Infusion DMSO  :  Dimethyl Sulfooksida S. mutans : Streptococcus mutans E.coli  : Escherichia coli CFU  :  Colony Forming Unit µL  : Mikroliter  mL  : Mililiter µg  : Mikrogram mg  : Miligram                   xiii  INTISARI   Kulit buah kakao (Theobroma cacao L.) kaya akan kandungan fenolik seperti tannin, epikatekin-3-galat dan asam sinamat, terdapat juga alkaloid dan flavonoid yang dapat digunakan sebagai antibakteri, antioksidan, dan antiinflamasi. Fenolik merupakan senyawa polar yang dapat larut dengan penyari aseton. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri fraksi etanol-air ekstrak aseton kulit buah kakao terhadap S. mutans dan E. coli serta mengetahui senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri.  Kulit buah kakao di ekstraksi dengan aseton secara maserasi dan dilakukan fraksinasi dengan metode partisi cair-cair menggunakan pelarut etanol-air dengan n-heksan dan etil asetat sehingga didapatkan fraksi etanol-air. Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi disk dengan konsentrasi 3,0 mg/disk, 3,5 mg/disk, 4,0 mg/disk, 4,5 mg/disk dan 5,0 mg/disk. Selanjutnya dilakukan KLT untuk identifikasi senyawa aktif, dengan fase diam silika GF 254 dan fase gerak metanol:air (3:7) v/v. Uji bioautografi dengan metode bioautografi kontak. Hasil penelitian menunjukkan fraksi etanol-air ekstrak aseton kulit buah kakao hingga konsentrasi 5,0 mg/disk tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap E. coli, tetapi pada konsentrasi 3,5 mg/disk memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. mutans dengan zona hambat 6,58±0,1 mm. Hasil uji KLT dan hasil bioautografi fraksi etanol-air terhadap S. mutans menunjukkan golongan fenolik dan alkaloid yang memiliki aktivitas antibakteri.  Kata kunci: Theobroma cacao L., Streptococcus mutans, Escherichia coli,  antibakteri, fraksi etanol- air 

Aktivitas Antibakteri Dan Bioautografi Fraksi Etanol-Air Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao ( Theobroma cacao L. ) Terhadap Streptococcus mutans DAN Escherichia coli

Salah satu tanaman tropis yang banyak mengandung polifenol adalah kakao (Theobroma cacao L.). Kulit buah kakao belum banyak dimanfaatkan. Polifenol diketahui memiliki aktivitas sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah kakao terhadap Streptococcus mutans dan Escherichia coli.

Ekstraksi menggunakan maserasi dengan pelarut etanol 96%. Metode disk difusi (Kirby Bauer) digunakan dalam uji aktivitas antibakteri. Seri konsentrasi yang digunakan dalam pengujian terhadap bakteri Streptococcus mutans adalah 0,5 mg/disk, 1 mg/disk, 1,5 mg/disk, 2 mg/disk, dan 2,5 mg/disk. Pada bakteri Escherichia coli digunakan seri konsentrasi 1 mg/disk, 2 mg/disk, 3 mg/disk, 4 mg/disk dan 5 mg/disk. Bioautografi digunakan untuk mengetahui

golongan senyawa yang aktif sebagai antibakteri dengan terlebih dahulu dilakukan KLT dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak n-heksan : etil asetat : metanol (12:7:1) v/v/v. Ekstrak memiliki aktivitas terhadap bakteri Streptococcus mutans dengan diameter zona hambat 9±0,0 mm pada konsentrasi 2,5 mg/disk. Hasil KLT menunjukkan ekstrak mengandung fenolik, terpenoid, kumarin dan flavonol.

Bioautografi kontak yang dilakukan menunjukkan bahwa senyawa yang beraktivitas sebagai antibakteri adalah fenolik

Burhanudin, Muhammad Rio

AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN BIOAUTOGRAFI EKSTRAK  ETANOL KULIT BUAH KAKAO (Theobroma cacao L.) TERHADAP Streptococcus mutans DAN Escherichia coli   SKRIPSI       Oleh: MUHAMMAD RIO BURHANUDIN K 100 090 106       FAKULTAS FARMASI  UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2013 i AKTIVTAS ANTIBAKTERI DAN BIOAUTOGRAFI  EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH KAKAO (Theobroma cacao L.) TERHADAP  Streptococcus mutans DAN Escherichia coli      SKRIPSI  Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai  derajat Sarjana Farmasi (S., Farm.) pada Fakultas Farmasi  Universitas Muhammadiyah Surakarta di Surakarta        Oleh :  MUHAMMAD RIO BURHANUDIN K 100 090 106         FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIAH SURAKARTA SURAKARTA 2013  PENGESAHAI\ SKRIPSIBerjudul:AKTIVTAS ANTIBAKTERI DAN BIOAUTOGRAFIEKSTRAK ETANOL KULIT BUAH KAKAO(Theobroma cscao L.) TERJIADAPStreptococcus mutans DAN Escherichia coliOleh :MUHAMMAD RIO BURHANUDINK 100 090 106Dipertahankan dihadapan Panitia Penguji SkripsiF akultas Farmasi Universitas Muhammadiyah SurakartaPada Tanggal z 24 April 2013MengetahuiFakultas FarmasiPembimbing Utama Pembimbing Pendamping.Biotech., Apt.) (Rima Munawhroh, M.Si., Apt.)Penguji , fe.Z=1. Dr. Muhtadi, M.Si. l. // --.,-z. Ika Trisharyanti, D.K., M.Farm., oor. d 2. Dobq t3. Peni Indrayudha, M.Biotech., Apt. ' ilhl} @4. Rima Munawaroh, M.Sc., Apt. V / l%-as Muhammadiyah Surakarta&a,Emmad Da'i, M.Si.o Apt.iii DEKLARASI   Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.               Surakarta, 30 Maret 2013    (Muhammad Rio Burhanudin)               iv KATA PENGANTAR  Assalamu’alaikum Wr. Wb. Alhamdulillah, segala puji syukur hanya kepada Allah SWT yang selalu memberikan jalan dan kemudahan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Aktivitas Antibakteri dan Bioautografi Ekstrak Etanol Kulit Buah Kakao (Theobroma caca L.) terhadap Streptococcus mutans dan Escherichia coli”. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Penulis telah banyak dibimbing, dibantu dan didukung oleh berbagai pihak. Maka dengan segala kerendahan hati mengucapkan terima kasih kepada: 1. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M. Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. 2. Bapak Peni Indrayudha, M., Biotech, Apt. selaku pembimbing utama dan Ibu Rima Munawaroh, M.Sc., Apt. selaku pembimbing pendamping. 3. Bapak Dr. Muhtadi, M.Si. selaku Penguji I dan Ibu Ika Trisharyanti, D.K., M.Farm., Apt. selaku penguji II.  4. Kedua orang tua tercinta, Ibu Nunuk Sapariswati dan Bapak Mulyono. 5. Teman seperjuanganku Nur, Eka, Candra dan Lusi dan teman-temanku di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini jauh dari kata sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharap kritik dan saran bagi kesempurnaan skripsi ini. Akhir kata, penulis berharap semoga skripsi ini bermanfaat bagi pembaca dan penulis sendiri. Terimakasih. Wassalamu’alaikum wr.wb.        Surakarta, 15 Maret 2013           (Penulis) v  DAFTAR ISI  HALAMAN JUDUL ........................................................................................  i PENGESAHAN ...............................................................................................  ii DEKLARASI ................................................................................................... iii KATA PENGANTAR ..................................................................................... iv DAFTAR ISI ....................................................................................................  v DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... viii DAFTAR TABEL ............................................................................................  ix DAFTAR LAMPIRAN  ...................................................................................  x DAFTAR SINGKATAN ................................................................................. xi INTISARI .........................................................................................................  xii BAB I. PENDAHULUAN ............................................................................... 1 A. Latar Belakang Masalah ....................................................................... 1 B. Perumusan Masalah .............................................................................. 3 C. Tujuan Penelitian .................................................................................. 3 D. Tinjauan Pustaka .................................................................................. 3 1. Tanaman Kakao (Theobroma cacao L.) .......................................... 3 a. Klasifikasi Tanaman ................................................................... 3 b. Ciri Morfologi Buah Kakao ........................................................ 3 c. Khasiat ........................................................................................ 4 2. Streptococcus mutans ...................................................................... 4 3. Eschericia coli ................................................................................. 5 4. Uji Antibakteri ................................................................................. 5 5. Kromatografi Lapis Tipis dan Bioautografi .................................... 6 E. Landasan Teori ..................................................................................... 6 F. Hipotesis ............................................................................................... 7 BAB II. METODE PENELITIAN ................................................................... 8 A.  Kategori Penelitian .............................................................................. 8 B. Variabel Penelitian ............................................................................... 8 1. Variabel Bebas ................................................................................. 8 vi  2. Variabel tergantung ......................................................................... 8 3. Variabel terkendali .......................................................................... 8 C. Bahan dan Alat ..................................................................................... 8 1. Alat-alat yang digunakan ................................................................. 8 2. Bahan-bahan yang digunakan .......................................................... 9 D. Tempat Penelitian ................................................................................. 9 E. Jalannya Penelitian ............................................................................... 9 1. Determinasi ...................................................................................... 9 2. Pengumpulan Sampel Tanaman ...................................................... 10 3. Pembuatan Estrak ............................................................................ 10 4. Persiapan Alat dan Bahan ................................................................ 10 a. Sterilisasi ..................................................................................... 10 b. Preparasi Media .......................................................................... 11 5. Pewarnaan Bakteri ........................................................................... 11 6. Penyiapan Inokulum Bakteri ........................................................... 11 7. Pembuatan Larutan Uji .................................................................... 11 a. Pembuatan Larutan Stok ............................................................. 11 b. Pembuatan Seri Konsentrasi ....................................................... 12 8. Uji Aktivitas Antibakteri ................................................................. 12 9. Uji kandungan senyawa dengan kromatografi lapis tipis. ............... 12 a. Penyiapan uji KLT ................................................................... 12 b. Pemilihan dan optimasi fase gerak. .......................................... 12 c. Elusi .......................................................................................... 12 10. Uji Bioautografi............................................................................. 13 F. Analisis Data ........................................................................................ 13 1. Uji antibakteri .................................................................................. 13 2. Analisis Kandungan Senyawa dalam Ekstrak Etanol Kulit Buah (Theobroma cacao L.) ..................................................................... 13 3. Analisis Bioautografi ....................................................................... 13 BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN......................................................... 14 A. Determinasi Tanaman .......................................................................... 14 vii  B. Ekstraksi ............................................................................................... 14 C. Identifikasi Bakteri ............................................................................... 15 D. Uji Aktivitas Antibakteri ...................................................................... 16 E. Kromatografi Lapis Tipis ..................................................................... 18 F. Uji Bioautografi .................................................................................... 20 BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................ 22 A. Kesimpulan ........................................................................................... 22 B. Saran ..................................................................................................... 22 DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 23 LAMPIRAN ..................................................................................................... 27                     viii  DAFTAR GAMBAR  Gambar 1. Buah Kakao (Theobroma cacao L.)  ..............................................  4 Gambar 2. Hasil Pengecatan Gram Bakteri Escherichia coli  dan Streptococcus mutans  ................................................................... 15 Gambar 3. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Buah Kakao terhadap S.mutans dan E.coli ............................................. 17 Gambar 4. Kromatogram Ekstrak Etanol Kulit Buah Kakao dengan Fase Gerak n-Heksan : Etil Asetat : Metanol (12:7:1) v/v/v ................. 19 Gambar 5. Hasil Uji Bioautografi terhadap Bakteri Streptococcus mutans dengan fase gerak n-Heksan : Etil Asetat : Metanol (12:7:1) ....... 21                     ix  DAFTAR TABEL  Tabel 1.  Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah kakao terhadap Streptococcus mutans dan Escherichia coli (n=3)  ................... 17 Tabel 2.  Hasil uji kromatografi lapis tipis terhadap ekstrak etanol kulit kakao dengan  fase gerak n- heksan : etil asetat : metanol (12:7:1) dan fase diam Silica gel GF 254 (jarak elusi 6 cm)  ................................  20                         x  DAFTAR LAMPIRAN  Lampiran 1.  Surat Determinasi  ...................................................................... 27 Lampiran 2.  Perhitungan Rendemen Ekstrak .................................................. 29 Lampiran 3.  Pembuatan Seri Konsentrasi Ekstrak Etanol Kulit Buah Kakao .......................................................................................... 30 Lampiran 4.  Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Buah Kakao ................................................................................. 32                                                            xi  DAFTAR SINGKATAN   BHI    : Brain Heart Infusion MH    : Mueller Hilton GF    : Gips Flourecense KLT    : Kromatografi Lapis Tipis LB    : Liebermann Burchard (LB) μL    : Mikroliter UV    : Ultraviolet VIS    : Visibel mL    : Mililiter mm    : Milimeter g    : Gram μg    : Mikrogram mg    : Miligram DMSO   : Dimetilsulfoksida E.coli   : Escherichia coli S.mutans  : Streptococcus mutans MT   : Massachussetts Institute of Technology                          xii  INTISARI  Salah satu tanaman tropis yang banyak mengandung polifenol adalah kakao (Theobroma cacao L.). Kulit buah kakao belum banyak dimanfaatkan. Polifenol diketahui memiliki aktivitas sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah kakao terhadap Streptococcus mutans dan Escherichia coli.  Ekstraksi menggunakan maserasi dengan pelarut etanol 96%. Metode disk difusi (Kirby Bauer) digunakan dalam uji aktivitas antibakteri. Seri konsentrasi yang digunakan dalam pengujian terhadap bakteri Streptococcus mutans adalah 0,5 mg/disk, 1 mg/disk, 1,5 mg/disk, 2 mg/disk, dan 2,5 mg/disk. Pada bakteri Escherichia coli digunakan seri konsentrasi 1 mg/disk, 2 mg/disk, 3 mg/disk, 4 mg/disk dan 5 mg/disk. Bioautografi digunakan untuk mengetahui golongan senyawa yang aktif sebagai antibakteri dengan terlebih dahulu dilakukan KLT dengan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak n-heksan : etil asetat : metanol (12:7:1) v/v/v.  Ekstrak memiliki aktivitas terhadap bakteri Streptococcus mutans dengan diameter zona hambat 9±0,0 mm pada konsentrasi 2,5 mg/disk. Hasil KLT menunjukkan ekstrak mengandung fenolik, terpenoid, kumarin dan flavonol. Bioautografi kontak yang dilakukan menunjukkan bahwa senyawa yang beraktivitas sebagai antibakteri adalah fenolik.  Kata kunci : Theobroma cacao L, antibakteri, Streptococcus mutans,        Escherichia coli, bioautografi  

Aktivitas Antibakteri Dan Bioautografi Ekstrak Etanol Kulit Buah Kakao (Theobroma cacao L.) Terhadap Streptococcus mutans Dan Escherichia coli

AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN BIOAUTOGRAFI EKSTRAK ASETON KULIT BUAH KAKAO (Theobroma cacao L.) TERHADAP Streptococcus mutans DAN Escherichia coli   SKRIPSI   Oleh : CANDRA DWI HIDAYATI                                                               K 100 090 101     FAKULTAS FARMASI                                                        UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA                                                                          SURAKARTA                                                                                        2013 ii AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN BIOAUTOGRAFI EKSTRAK ASETON KULIT BUAH KAKAO (Theobroma cacao L.) TERHADAP Streptococcus mutans DAN Escherichia coli  SKRIPSI  Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai  derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi  Universitas Muhammadiyah Surakarta  di Surakarta   Oleh: CANDRA DWI HIDAYATI K 100 090 101    FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2013 iii    iv             v KATA PENGANTAR  Puji syukur senantiasa penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT atas segala rahmat, hidayah, dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN BIOAUTOGRAFI EKSTRAK ASETON KULIT BUAH KAKAO (Theobroma cacao L.) TERHADAP Streptococcus mutans DAN Escherichia coli” sebagai persyaratan dalam menyelesaikan studi S1 di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Dalam penyusunan skripsi ini penulis banyak mendapat bantuan dan dukungan dari berbagai pihak sehingga hambatan yang ada dapat dihadapi dan dilalui dengan penuh sabar. Untuk itu penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. 2. Bapak Peni Indrayudha, M. Biotech., Apt dan Ibu Rima Munawaroh, M.Sc., Apt selaku dosen pembimbing. 3. Bapak Dr. Haryoto. M.Sc. dan Ibu Ratna Yuliani, M.Biotech.St selaku dosen penguji. 4. Kedua orang tua penulis, ayahanda Maimun, S.Pdi dan ibunda Sri Rahayu. 5. Kakakku Moh. Mujibbus Syauqi dan Rizki Permata Kumala Prisca serta keponakanku Salsabila Nadhifa Aqila Syauqi. Penulis menyadari bahwa skripsi ini jauh dari sempurna. Untuk itu kritik dan saran membangun dari pembaca sangat diharapkan. Penulis berharap semoga karya ini dapat bermanfaat bagi pengembangan ilmu pengetahuan.  Surakarta, 14 Februari 2013   Peneliti   vi DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ..............................................................................................  i HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................  ii DEKLARASI .........................................................................................................  iii KATA PENGANTAR ............................................................................................  iv DAFTAR ISI .........................................................................................................  v DAFTAR TABEL ..................................................................................................  vii DAFTAR GAMBAR ..............................................................................................  viii DAFTAR LAMPIRAN ...........................................................................................  ix DAFTAR SINGKATAN ........................................................................................  x INTISARI ..............................................................................................................  xi BAB I. PENDAHULUAN .....................................................................................  1 A. Latar Belakang Masalah ...........................................................  1 B. Perumusan Masalah .................................................................  2 C. Tujuan Penelitian .....................................................................  2 D. Tinjauan Pustaka .....................................................................  3 1. Tanaman kakao ....................................................................  3 2. Streptococcus mutans ..........................................................  4 3. Escherichia coli ..................................................................  4 4. Antibakteri ..........................................................................       5 5. Metode Difusi Agar .............................................................       5 6. Bioautografi ........................................................................  5 E. Landasan Teori ........................................................................  6 F. Hipotesis .................................................................................  6  vii BAB II. METODE PENELITIAN ..........................................................................  7 A.   Kategori Penelitian dan Variabel Penelitian ..............................  7 B.   Alat dan Bahan ........................................................................  7 C.   Tempat Penelitian ....................................................................  8 D.   Jalannya Penelitian ..................................................................  8 1.   Determinasi Tanaman .......................................................  8 2.   Penyiapan Bahan ...............................................................  8 3.   Pembuatan Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao ...................  8 4.   Sterilisasi Alat dan Bahan .................................................  8 5.   Pembuatan Media ..............................................................  9 6.   Pewarnaan Bakteri ............................................................  9 7.   Pembuatan Suspensi Bakteri .............................................  9 8.   Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Aseton Kulit Buah    Kakao.................................................................... ...............  9 9.   KLT Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao ............................  11 10. Uji Bioautografi Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao ...........  11 E.   Analisis Data ............................................................................  11 BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN.......................................................  13 A. Hasil ........................................................................................  13 1. Determinasi Tanaman ..........................................................  13 2. Hasil Ekstraksi .....................................................................  13 3. Identifikasi Bakteri ..............................................................  14 4. Uji Aktivitas Antibakteri ......................................................  14 5. Uji Kandungan Senyawa dengan KLT .................................  17 6. Uji Bioautografi ...................................................................  19 B. Pembahasan .............................................................................  20 1. Aktivitas Antibakteri ............................................................  20 2. Senyawa Yang Bertanggung Jawab Sebagai Antibakteri ......  21 BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................  23 A. Kesimpulan .............................................................................  23 viii B. Saran .......................................................................................  23 DAFTAR PUSTAKA .............................................................................................       24 LAMPIRAN ..........................................................................................................       28                  ix DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1.  Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak aseton kulit buah  kakao terhadap Streptococcus mutans.......................................................  16 Tabel 2.  Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak aseton kulit buah  kakao terhadap Escherichia coli ...............................................................  16 Tabel 3. Hasil KLT ekstrak aseton kulit buah kakao ...............................................  18               x DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1.  Buah kakao ...........................................................................................  3 Gambar 2.  Pembuatan seri konsentrasi ekstrak aseton kulit buah kakao  untuk uji aktivitas antibakteri ..............................................................  10 Gambar 3.  Hasil pengecatan Gram bakteri S. mutans (A) dan E. coli (B) ................  14 Gambar 4.  Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak aseton kulit buah kakao  terhadap S. mutans dan E. coli .............................................................  15 Gambar 5.  Hasil pengamatan KLT ekstrak aseton kulit buah kakao ........................  17 Gambar 6.  Hasil uji bioautografi.............................................................................  20             xi DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1.  Surat keterangan determinasi ..............................................................  28  Lampiran 2.  Perhitungan rendemen ekstrak aseton kulit buah kakao  (Theobroma cacao L.)......................................................................  30 Lampiran 3.  Perhitungan seri konsentrasi ...............................................................  31 Lampiran 4.  Hasil uji aktivitas antibakteri ..............................................................  33 Lampiran 5.  Perhitungan Rf hasil KLT...................................................................  34 Lampiran 6.  Hasil uji buih untuk identifikasi saponin pada ekstrak  aseton kulit buah kakao.....................................................................  35             xii DAFTAR SINGKATAN  E. coli  : Escherichia coli S. mutans : Streptococcus mutans T. cacao : Theobroma cacao KHM  : Kadar Hambat Minimum DNA  : Deoxyribonucleic acid RNA  : Ribonucleic acid LAF  : Laminar Air Flow KLT  : Kromatografi Lapis Tipis MH  : Mueller Hinton NA  : Nutrient Agar BHI  : Brain Heart Infusion DMSO  : Dimethylsulfoxide CFU  : Colony Forming Unit UV  : Ultraviolet Rf  : Retardation factor  xiii INTISARI   Kulit buah kakao terbukti mempunyai aktivitas antibakteri. Kulit buah kakao mengandung senyawa fenolik seperti kuersetin, resorsinol, flavonoid, dan tanin yang dapat dimanfaatkan sebagai agen antibakteri alami. Pelarut yang paling baik untuk mengekstraksi tanaman yang banyak mengandung komponen fenolik yaitu aseton. Tujuan penelitian ini yaitu menentukan aktivitas antibakteri ekstrak aseton kulit buah kakao segar dan menentukan kandungan senyawa yang bertanggung jawab sebagai antibakteri.  Kulit buah kakao segar diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut aseton. Ekstrak diuji aktivitas antibakteri terhadap Streptococcus mutans dan Escherichia coli dengan metode difusi disk. Kandungan senyawa diuji dengan KLT dan penentuan senyawa yang bertanggung jawab sebagai antibakteri diuji dengan bioautografi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak aseton kulit buah kakao mempunyai aktivitas antibakteri terhadap S. mutans mulai konsentrasi 1 mg/disk dengan diameter zona hambat 6,5±0,0 mm dan tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap E. coli. Berdasarkan uji KLT dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak kloroform : n-heksan (9:1) v/v, ekstrak aseton kulit buah kakao mengandung senyawa fenolik, flavonoid, saponin, dan alkaloid. Senyawa yang bertanggung jawab sebagai antibakteri terhadap S. mutans yaitu fenolik, flavonoid, dan saponin. Kata kunci : Kulit buah kakao, Streptococcus mutans, Escherichia coli, KLT.    