Lugones, Luis Gastón

ARTS repository - University of Groningen

   University of GroningenFunction and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllum communeand Agaricus bisporusLugones, Luis GastónIMPORTANT NOTE: You are advised to consult the publisher's version (publisher's PDF) if you wish to cite fromit. Please check the document version below.Document VersionPublisher's PDF, also known as Version of recordPublication date:1998Link to publication in University of Groningen/UMCG research databaseCitation for published version (APA):Lugones, L. G. (1998). Function and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllumcommune and Agaricus bisporus. s.n.CopyrightOther than for strictly personal use, it is not permitted to download or to forward/distribute the text or part of it without the consent of theauthor(s) and/or copyright holder(s), unless the work is under an open content license (like Creative Commons).The publication may also be distributed here under the terms of Article 25fa of the Dutch Copyright Act, indicated by the “Taverne” license.More information can be found on the University of Groningen website: https://www.rug.nl/library/open-access/self-archiving-pure/taverne-amendment.Take-down policyIf you believe that this document breaches copyright please contact us providing details, and we will remove access to the work immediatelyand investigate your claim.Downloaded from the University of Groningen/UMCG research database (Pure): http://www.rug.nl/research/portal. For technical reasons thenumber of authors shown on this cover page is limited to 10 maximum.Download date: 16-07-2023ISIfoIs'P)din&ad&heIESionSamenvattingHet in dit proefschrift beschreven werk betreft voornamelijk de expressie en functie van hydrofobinegenen in de homobasidiomyceten Schizophyllum commune en Agaricus bisporus (gewonechampignon).Hoofdstuk II and Hoofdstuk III behandelen de isolatie en karakterisering van tweehydrofobines uit A. bisporus en van de voor deze eiwitten coderende genen welke tot expressiekomen in verschillende levensstadia van de organisme. ABH| komt tot expressie in devntchtlichÍImen en ABH3 in het vegetatieve mycelium van A. bisporus. Beide hydrofobines blekeneigenschappen te hebben vergelijkbaar met die van de SC3 hydrofobine van S. commune. ABHIgeeft hydrofobiciteit aan de meest externe weefsels van de hoed van de vmchtlichamen maar is ookin mindere mate aarwezig in het interne weefsel van de hoed. ABH3 wordt uitgescheiden in hetcultuunnedium en bedekÍ luchthyfen welke hierdoor hydrofoob zijn. Mogelijkerwijs is ABH3 ookbeffokken bij het doorbreken van de wateroppervlak door middel van een verlaging van deoppervlaktespanning, zoals bleek uit gedeeltelijke complementatie van een ^SCi mutant van S.commune door ABH3.In Hoofdstuk IV wordt de isolatie en karakterisering van het hydrofobine SC4 van ,S.commune beschreven. Antilichamen tegen SC4 en ABHI werden gebruikt om deze twee eiwitten inhet plectenchym van vmchtlichamen van respectievelijk, S. commune en A. bisporus te lokaliseren.Op grond van de in vitro bepaalde eigenschappen van deze hydrofobines, wordt Íumgenomen dathyfen in het plenctenchym hydrofobine monomeren uitscheiden welke diffunderen in deextracellulaire matrix en dat, wanneer deze monomeren in contact komen met lucht, assemblageopfreedt. Hierdoor worden de luchtkanalen aanwezig in deze weefsels voorzien van een hydrofobebedekking, in overeenstemming met de gevonden lokalisatie vandeze hydrofobines. Hierdoor wordtwaarschijnlijk bereikt dat deze kanalen open blijven en niet gevuld worden met water onder natteomstandigheden waadoor de gas uitwisseling in deze weefsels beperkt zou worden.Om te onderzoeken of hydrofobines met vergelijkbare frsisch-chemische eigenschappenelkaar kunnen vervangen werd er gepoogd om de fenotype van een SC-3 mutant van S. commune tecomplementeren met het ABHI gen van A. bisporus (Hoofdstuk \r). Hoewel de expressie van ABHIin deze stam hoog was en leidde tot het verschijning van rodlets op de oppervlakÍe van luchthyfen,werd geen herstel waargenomen van het hydrofobe karakter van deze hyf.n. Waarschijnlijk komt ditdoor de gevoeligheid van ABHI voor proteolyse.Hoofdstuk VI rapporteert de base volgorde van het ,SCó gen dat voor een vierdehydrofobine van S. commune bleek te coderen. Het SC6 eiwit heeft een opvallend lang hydrofielsegment voor het eerste cysteine residu van de voorspelde "matuÍe" eiwit, veel langer dan in anderebekende hydrofobines. Om de eigenschappen van SC6 te bestuderen, werd geprobeerd over-expressievan SC6 in een monokaryon te verkrijgen. Hoewel een hoge ,SCó mRNA accumulatie werdwaargenomen wanneer de SCd coderende gebied onder confole van de regulatorische sequenties vanSCi werd gebracht, kon geen SC6 eiwit worden gedetecteerd.Hoofdstuk VII beschrijft de isolatie van het SC15 gen dat codeert voor een eiwit databundant wordt uitgescheiden in het cultuurmedium en dat ook aanwezig is in de polysaccharidematrix die de luchthyfen omgeeft. Evenals,SC3 schijnt,SCIJ gereguleerd te worden door de MATBgenen. De betrokkenheid van SCl5 in de vonning van luchthyfen wordt gesuggereerd door het feitdat mutaties welke de fonnatie van luchthyfen negatief beurvloeden (thn and matBcon) ook deexpressie van .SC1J remmen.Hoofdstuk VIII behandelt een fenomeen waargenomen tijdens de complementatie)onfornceLblefornÍÍrssusrentand)nesIeneI fortiae.mts.gousrd tolike87SaNagNvarrnlcexperimenten beschreven in Hoofdstuk V. ABHl,,SCi en SCó bleken alleen tot expressie te komen(mRNA vorming) wailleer intronen aanwezig wzren in de getranscribeerde deel van het gen. Deinronen bleken nodig te zijn voor de u.r*.rking van het primaire transcript tot mRNA. Introductievan één kunstmatigè itttron was genoeg om mRNA accumulatie te induceren uitgaande van eeninfionloos gen. Deze resultaten openen nieuwe perspectieven voor de expressie van heterologe genenin homobasidiomYceten.AIic, Madenine494.Arundlrtype I 1conditicÁsgeirsUniversÁsgeirschromorÁsgeirscontrolI28t-tiÁsgeirsgenes olBiol22Austin,NeurostrBarrettMicrobiBell-Peris allelic6,2382-BinningbasidiorBowdenthe ceralBowden(1ee6).MicrobeBuchmaMol Cel,Callis, JDev l, ICarle.Usplicing.CarreznR. (lee0nidulansCasseltoMicrobitChee, P.in foreigChung, IMol CellCraig, Gstipe elorDe GrocAgaricuscaps duriDe Vriecomplext88

Dutch

Function and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllum commune and Agaricus bisporus

Dissertations of the University of Groningen

Proceedings - University of Groningen

   University of GroningenFunction and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllum communeand Agaricus bisporusLugones, Luis GastónIMPORTANT NOTE: You are advised to consult the publisher's version (publisher's PDF) if you wish to cite fromit. Please check the document version below.Document VersionPublisher's PDF, also known as Version of recordPublication date:1998Link to publication in University of Groningen/UMCG research databaseCitation for published version (APA):Lugones, L. G. (1998). Function and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllumcommune and Agaricus bisporus. s.n.CopyrightOther than for strictly personal use, it is not permitted to download or to forward/distribute the text or part of it without the consent of theauthor(s) and/or copyright holder(s), unless the work is under an open content license (like Creative Commons).The publication may also be distributed here under the terms of Article 25fa of the Dutch Copyright Act, indicated by the “Taverne” license.More information can be found on the University of Groningen website: https://www.rug.nl/library/open-access/self-archiving-pure/taverne-amendment.Take-down policyIf you believe that this document breaches copyright please contact us providing details, and we will remove access to the work immediatelyand investigate your claim.Downloaded from the University of Groningen/UMCG research database (Pure): http://www.rug.nl/research/portal. For technical reasons thenumber of authors shown on this cover page is limited to 10 maximum.Download date: 11-10-2022ISIfoIs'P)din&ad&heIESionSamenvattingHet in dit proefschrift beschreven werk betreft voornamelijk de expressie en functie van hydrofobinegenen in de homobasidiomyceten Schizophyllum commune en Agaricus bisporus (gewonechampignon).Hoofdstuk II and Hoofdstuk III behandelen de isolatie en karakterisering van tweehydrofobines uit A. bisporus en van de voor deze eiwitten coderende genen welke tot expressiekomen in verschillende levensstadia van de organisme. ABH| komt tot expressie in devntchtlichÍImen en ABH3 in het vegetatieve mycelium van A. bisporus. Beide hydrofobines blekeneigenschappen te hebben vergelijkbaar met die van de SC3 hydrofobine van S. commune. ABHIgeeft hydrofobiciteit aan de meest externe weefsels van de hoed van de vmchtlichamen maar is ookin mindere mate aarwezig in het interne weefsel van de hoed. ABH3 wordt uitgescheiden in hetcultuunnedium en bedekÍ luchthyfen welke hierdoor hydrofoob zijn. Mogelijkerwijs is ABH3 ookbeffokken bij het doorbreken van de wateroppervlak door middel van een verlaging van deoppervlaktespanning, zoals bleek uit gedeeltelijke complementatie van een ^SCi mutant van S.commune door ABH3.In Hoofdstuk IV wordt de isolatie en karakterisering van het hydrofobine SC4 van ,S.commune beschreven. Antilichamen tegen SC4 en ABHI werden gebruikt om deze twee eiwitten inhet plectenchym van vmchtlichamen van respectievelijk, S. commune en A. bisporus te lokaliseren.Op grond van de in vitro bepaalde eigenschappen van deze hydrofobines, wordt Íumgenomen dathyfen in het plenctenchym hydrofobine monomeren uitscheiden welke diffunderen in deextracellulaire matrix en dat, wanneer deze monomeren in contact komen met lucht, assemblageopfreedt. Hierdoor worden de luchtkanalen aanwezig in deze weefsels voorzien van een hydrofobebedekking, in overeenstemming met de gevonden lokalisatie vandeze hydrofobines. Hierdoor wordtwaarschijnlijk bereikt dat deze kanalen open blijven en niet gevuld worden met water onder natteomstandigheden waadoor de gas uitwisseling in deze weefsels beperkt zou worden.Om te onderzoeken of hydrofobines met vergelijkbare frsisch-chemische eigenschappenelkaar kunnen vervangen werd er gepoogd om de fenotype van een SC-3 mutant van S. commune tecomplementeren met het ABHI gen van A. bisporus (Hoofdstuk \r). Hoewel de expressie van ABHIin deze stam hoog was en leidde tot het verschijning van rodlets op de oppervlakÍe van luchthyfen,werd geen herstel waargenomen van het hydrofobe karakter van deze hyf.n. Waarschijnlijk komt ditdoor de gevoeligheid van ABHI voor proteolyse.Hoofdstuk VI rapporteert de base volgorde van het ,SCó gen dat voor een vierdehydrofobine van S. commune bleek te coderen. Het SC6 eiwit heeft een opvallend lang hydrofielsegment voor het eerste cysteine residu van de voorspelde "matuÍe" eiwit, veel langer dan in anderebekende hydrofobines. Om de eigenschappen van SC6 te bestuderen, werd geprobeerd over-expressievan SC6 in een monokaryon te verkrijgen. Hoewel een hoge ,SCó mRNA accumulatie werdwaargenomen wanneer de SCd coderende gebied onder confole van de regulatorische sequenties vanSCi werd gebracht, kon geen SC6 eiwit worden gedetecteerd.Hoofdstuk VII beschrijft de isolatie van het SC15 gen dat codeert voor een eiwit databundant wordt uitgescheiden in het cultuurmedium en dat ook aanwezig is in de polysaccharidematrix die de luchthyfen omgeeft. Evenals,SC3 schijnt,SCIJ gereguleerd te worden door de MATBgenen. De betrokkenheid van SCl5 in de vonning van luchthyfen wordt gesuggereerd door het feitdat mutaties welke de fonnatie van luchthyfen negatief beurvloeden (thn and matBcon) ook deexpressie van .SC1J remmen.Hoofdstuk VIII behandelt een fenomeen waargenomen tijdens de complementatie)onfornceLblefornÍÍrssusrentand)nesIeneI fortiae.mts.gousrd tolike87SaNagNvarrnlcexperimenten beschreven in Hoofdstuk V. ABHl,,SCi en SCó bleken alleen tot expressie te komen(mRNA vorming) wailleer intronen aanwezig wzren in de getranscribeerde deel van het gen. Deinronen bleken nodig te zijn voor de u.r*.rking van het primaire transcript tot mRNA. Introductievan één kunstmatigè itttron was genoeg om mRNA accumulatie te induceren uitgaande van eeninfionloos gen. Deze resultaten openen nieuwe perspectieven voor de expressie van heterologe genenin homobasidiomYceten.AIic, Madenine494.Arundlrtype I 1conditicÁsgeirsUniversÁsgeirschromorÁsgeirscontrolI28t-tiÁsgeirsgenes olBiol22Austin,NeurostrBarrettMicrobiBell-Peris allelic6,2382-BinningbasidiorBowdenthe ceralBowden(1ee6).MicrobeBuchmaMol Cel,Callis, JDev l, ICarle.Usplicing.CarreznR. (lee0nidulansCasseltoMicrobitChee, P.in foreigChung, IMol CellCraig, Gstipe elorDe GrocAgaricuscaps duriDe Vriecomplext88

   University of GroningenFunction and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllum communeand Agaricus bisporusLugones, Luis GastónIMPORTANT NOTE: You are advised to consult the publisher's version (publisher's PDF) if you wish to cite fromit. Please check the document version below.Document VersionPublisher's PDF, also known as Version of recordPublication date:1998Link to publication in University of Groningen/UMCG research databaseCitation for published version (APA):Lugones, L. G. (1998). Function and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllumcommune and Agaricus bisporus. s.n.CopyrightOther than for strictly personal use, it is not permitted to download or to forward/distribute the text or part of it without the consent of theauthor(s) and/or copyright holder(s), unless the work is under an open content license (like Creative Commons).The publication may also be distributed here under the terms of Article 25fa of the Dutch Copyright Act, indicated by the “Taverne” license.More information can be found on the University of Groningen website: https://www.rug.nl/library/open-access/self-archiving-pure/taverne-amendment.Take-down policyIf you believe that this document breaches copyright please contact us providing details, and we will remove access to the work immediatelyand investigate your claim.Downloaded from the University of Groningen/UMCG research database (Pure): http://www.rug.nl/research/portal. For technical reasons thenumber of authors shown on this cover page is limited to 10 maximum.Download date: 06-06-2022ISIfoIs'P)din&ad&heIESionSamenvattingHet in dit proefschrift beschreven werk betreft voornamelijk de expressie en functie van hydrofobinegenen in de homobasidiomyceten Schizophyllum commune en Agaricus bisporus (gewonechampignon).Hoofdstuk II and Hoofdstuk III behandelen de isolatie en karakterisering van tweehydrofobines uit A. bisporus en van de voor deze eiwitten coderende genen welke tot expressiekomen in verschillende levensstadia van de organisme. ABH| komt tot expressie in devntchtlichÍImen en ABH3 in het vegetatieve mycelium van A. bisporus. Beide hydrofobines blekeneigenschappen te hebben vergelijkbaar met die van de SC3 hydrofobine van S. commune. ABHIgeeft hydrofobiciteit aan de meest externe weefsels van de hoed van de vmchtlichamen maar is ookin mindere mate aarwezig in het interne weefsel van de hoed. ABH3 wordt uitgescheiden in hetcultuunnedium en bedekÍ luchthyfen welke hierdoor hydrofoob zijn. Mogelijkerwijs is ABH3 ookbeffokken bij het doorbreken van de wateroppervlak door middel van een verlaging van deoppervlaktespanning, zoals bleek uit gedeeltelijke complementatie van een ^SCi mutant van S.commune door ABH3.In Hoofdstuk IV wordt de isolatie en karakterisering van het hydrofobine SC4 van ,S.commune beschreven. Antilichamen tegen SC4 en ABHI werden gebruikt om deze twee eiwitten inhet plectenchym van vmchtlichamen van respectievelijk, S. commune en A. bisporus te lokaliseren.Op grond van de in vitro bepaalde eigenschappen van deze hydrofobines, wordt Íumgenomen dathyfen in het plenctenchym hydrofobine monomeren uitscheiden welke diffunderen in deextracellulaire matrix en dat, wanneer deze monomeren in contact komen met lucht, assemblageopfreedt. Hierdoor worden de luchtkanalen aanwezig in deze weefsels voorzien van een hydrofobebedekking, in overeenstemming met de gevonden lokalisatie vandeze hydrofobines. Hierdoor wordtwaarschijnlijk bereikt dat deze kanalen open blijven en niet gevuld worden met water onder natteomstandigheden waadoor de gas uitwisseling in deze weefsels beperkt zou worden.Om te onderzoeken of hydrofobines met vergelijkbare frsisch-chemische eigenschappenelkaar kunnen vervangen werd er gepoogd om de fenotype van een SC-3 mutant van S. commune tecomplementeren met het ABHI gen van A. bisporus (Hoofdstuk \r). Hoewel de expressie van ABHIin deze stam hoog was en leidde tot het verschijning van rodlets op de oppervlakÍe van luchthyfen,werd geen herstel waargenomen van het hydrofobe karakter van deze hyf.n. Waarschijnlijk komt ditdoor de gevoeligheid van ABHI voor proteolyse.Hoofdstuk VI rapporteert de base volgorde van het ,SCó gen dat voor een vierdehydrofobine van S. commune bleek te coderen. Het SC6 eiwit heeft een opvallend lang hydrofielsegment voor het eerste cysteine residu van de voorspelde "matuÍe" eiwit, veel langer dan in anderebekende hydrofobines. Om de eigenschappen van SC6 te bestuderen, werd geprobeerd over-expressievan SC6 in een monokaryon te verkrijgen. Hoewel een hoge ,SCó mRNA accumulatie werdwaargenomen wanneer de SCd coderende gebied onder confole van de regulatorische sequenties vanSCi werd gebracht, kon geen SC6 eiwit worden gedetecteerd.Hoofdstuk VII beschrijft de isolatie van het SC15 gen dat codeert voor een eiwit databundant wordt uitgescheiden in het cultuurmedium en dat ook aanwezig is in de polysaccharidematrix die de luchthyfen omgeeft. Evenals,SC3 schijnt,SCIJ gereguleerd te worden door de MATBgenen. De betrokkenheid van SCl5 in de vonning van luchthyfen wordt gesuggereerd door het feitdat mutaties welke de fonnatie van luchthyfen negatief beurvloeden (thn and matBcon) ook deexpressie van .SC1J remmen.Hoofdstuk VIII behandelt een fenomeen waargenomen tijdens de complementatie)onfornceLblefornÍÍrssusrentand)nesIeneI fortiae.mts.gousrd tolike87SaNagNvarrnlcexperimenten beschreven in Hoofdstuk V. ABHl,,SCi en SCó bleken alleen tot expressie te komen(mRNA vorming) wailleer intronen aanwezig wzren in de getranscribeerde deel van het gen. Deinronen bleken nodig te zijn voor de u.r*.rking van het primaire transcript tot mRNA. Introductievan één kunstmatigè itttron was genoeg om mRNA accumulatie te induceren uitgaande van eeninfionloos gen. Deze resultaten openen nieuwe perspectieven voor de expressie van heterologe genenin homobasidiomYceten.AIic, Madenine494.Arundlrtype I 1conditicÁsgeirsUniversÁsgeirschromorÁsgeirscontrolI28t-tiÁsgeirsgenes olBiol22Austin,NeurostrBarrettMicrobiBell-Peris allelic6,2382-BinningbasidiorBowdenthe ceralBowden(1ee6).MicrobeBuchmaMol Cel,Callis, JDev l, ICarle.Usplicing.CarreznR. (lee0nidulansCasseltoMicrobitChee, P.in foreigChung, IMol CellCraig, Gstipe elorDe GrocAgaricuscaps duriDe Vriecomplext88

University of Groningen Research Database

  
 University of Groningen
Function and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllum commune
and Agaricus bisporus
Lugones, Luis Gastón
IMPORTANT NOTE: You are advised to consult the publisher's version (publisher's PDF) if you wish to cite from
it. Please check the document version below.
Document Version
Publisher's PDF, also known as Version of record
Publication date:
1998
Link to publication in University of Groningen/UMCG research database
Citation for published version (APA):
Lugones, L. G. (1998). Function and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllum
commune and Agaricus bisporus Groningen: s.n.
Copyright
Other than for strictly personal use, it is not permitted to download or to forward/distribute the text or part of it without the consent of the
author(s) and/or copyright holder(s), unless the work is under an open content license (like Creative Commons).
Take-down policy
If you believe that this document breaches copyright please contact us providing details, and we will remove access to the work immediately
and investigate your claim.
Downloaded from the University of Groningen/UMCG research database (Pure): http://www.rug.nl/research/portal. For technical reasons the
number of authors shown on this cover page is limited to 10 maximum.
Download date: 10-02-2018
IS
I
f
o
Is
'P
)d
in
&
ad
&
he
IES
ion
Samenvatting
Het in dit proefschrift beschreven werk betreft voornamelijk de expressie en functie van hydrofobine
genen in de homobasidiomyceten Schizophyllum commune en Agaricus bisporus (gewone
champignon).
Hoofdstuk II and Hoofdstuk III behandelen de isolatie en karakterisering van twee
hydrofobines uit A. bisporus en van de voor deze eiwitten coderende genen welke tot expressie
komen in verschillende levensstadia van de organisme. ABH| komt tot expressie in de
vntchtlichÍImen en ABH3 in het vegetatieve mycelium van A. bisporus. Beide hydrofobines bleken
eigenschappen te hebben vergelijkbaar met die van de SC3 hydrofobine van S. commune. ABHI
geeft hydrofobiciteit aan de meest externe weefsels van de hoed van de vmchtlichamen maar is ook
in mindere mate aarwezig in het interne weefsel van de hoed. ABH3 wordt uitgescheiden in het
cultuunnedium en bedekÍ luchthyfen welke hierdoor hydrofoob zijn. Mogelijkerwijs is ABH3 ook
beffokken bij het doorbreken van de wateroppervlak door middel van een verlaging van de
oppervlaktespanning, zoals bleek uit gedeeltelijke complementatie van een ^SCi mutant van S.
commune door ABH3.
In Hoofdstuk IV wordt de isolatie en karakterisering van het hydrofobine SC4 van ,S.
commune beschreven. Antilichamen tegen SC4 en ABHI werden gebruikt om deze twee eiwitten in
het plectenchym van vmchtlichamen van respectievelijk, S. commune en A. bisporus te lokaliseren.
Op grond van de in vitro bepaalde eigenschappen van deze hydrofobines, wordt Íumgenomen dat
hyfen in het plenctenchym hydrofobine monomeren uitscheiden welke diffunderen in de
extracellulaire matrix en dat, wanneer deze monomeren in contact komen met lucht, assemblage
opfreedt. Hierdoor worden de luchtkanalen aanwezig in deze weefsels voorzien van een hydrofobe
bedekking, in overeenstemming met de gevonden lokalisatie vandeze hydrofobines. Hierdoor wordt
waarschijnlijk bereikt dat deze kanalen open blijven en niet gevuld worden met water onder natte
omstandigheden waadoor de gas uitwisseling in deze weefsels beperkt zou worden.
Om te onderzoeken of hydrofobines met vergelijkbare frsisch-chemische eigenschappen
elkaar kunnen vervangen werd er gepoogd om de fenotype van een SC-3 mutant van S. commune te
complementeren met het ABHI gen van A. bisporus (Hoofdstuk \r). Hoewel de expressie van ABHI
in deze stam hoog was en leidde tot het verschijning van rodlets op de oppervlakÍe van luchthyfen,
werd geen herstel waargenomen van het hydrofobe karakter van deze hyf.n. Waarschijnlijk komt dit
door de gevoeligheid van ABHI voor proteolyse.
Hoofdstuk VI rapporteert de base volgorde van het ,SCó gen dat voor een vierde
hydrofobine van S. commune bleek te coderen. Het SC6 eiwit heeft een opvallend lang hydrofiel
segment voor het eerste cysteine residu van de voorspelde "matuÍe" eiwit, veel langer dan in andere
bekende hydrofobines. Om de eigenschappen van SC6 te bestuderen, werd geprobeerd over-expressie
van SC6 in een monokaryon te verkrijgen. Hoewel een hoge ,SCó mRNA accumulatie werd
waargenomen wanneer de SCd coderende gebied onder confole van de regulatorische sequenties van
SCi werd gebracht, kon geen SC6 eiwit worden gedetecteerd.
Hoofdstuk VII beschrijft de isolatie van het SC15 gen dat codeert voor een eiwit dat
abundant wordt uitgescheiden in het cultuurmedium en dat ook aanwezig is in de polysaccharide
matrix die de luchthyfen omgeeft. Evenals,SC3 schijnt,SCIJ gereguleerd te worden door de MATB
genen. De betrokkenheid van SCl5 in de vonning van luchthyfen wordt gesuggereerd door het feit
dat mutaties welke de fonnatie van luchthyfen negatief beurvloeden (thn and matBcon) ook de
expressie van .SC1J remmen.
Hoofdstuk VIII behandelt een fenomeen waargenomen tijdens de complementatie
)on
for
nce
Lble
for
nÍÍrs
sus
rent
and
)nes
Iene
I for
tiae.
mts.
gous
rd to
like
87
SaNagNvarrnlc
experimenten beschreven in Hoofdstuk V. ABHl,,SCi en SCó bleken alleen tot expressie te komen
(mRNA vorming) wailleer intronen aanwezig wzren in de getranscribeerde deel van het gen. De
inronen bleken nodig te zijn voor de u.r*.rking van het primaire transcript tot mRNA. Introductie
van één kunstmatigè itttron was genoeg om mRNA accumulatie te induceren uitgaande van een
infionloos gen. Deze resultaten openen nieuwe perspectieven voor de expressie van heterologe genen
in homobasidiomYceten.
AIic, M
adenine
494.
Arundlr
type I 1
conditic
Ásgeirs
Univers
Ásgeirs
chromor
Ásgeirs
control
I28t-ti
Ásgeirs
genes ol
Biol22
Austin,
Neurostr
Barrett
Microbi
Bell-Per
is allelic
6,2382-
Binning
basidior
Bowden
the ceral
Bowden(1ee6).
Microbe
Buchma
Mol Cel,
Callis, J
Dev l, I
Carle.U
splicing.
Carrezn
R. (lee0
nidulans
Casselto
Microbit
Chee, P.
in foreig
Chung, I
Mol Cell
Craig, G
stipe elor
De Groc
Agaricus
caps duri
De Vrie
complext
88


University of Groningen

   University of GroningenFunction and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllum communeand Agaricus bisporusLugones, Luis GastónIMPORTANT NOTE: You are advised to consult the publisher's version (publisher's PDF) if you wish to cite fromit. Please check the document version below.Document VersionPublisher's PDF, also known as Version of recordPublication date:1998Link to publication in University of Groningen/UMCG research databaseCitation for published version (APA):Lugones, L. G. (1998). Function and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllumcommune and Agaricus bisporus. Groningen: s.n.CopyrightOther than for strictly personal use, it is not permitted to download or to forward/distribute the text or part of it without the consent of theauthor(s) and/or copyright holder(s), unless the work is under an open content license (like Creative Commons).Take-down policyIf you believe that this document breaches copyright please contact us providing details, and we will remove access to the work immediatelyand investigate your claim.Downloaded from the University of Groningen/UMCG research database (Pure): http://www.rug.nl/research/portal. For technical reasons thenumber of authors shown on this cover page is limited to 10 maximum.Download date: 12-11-2019ISIfoIs'P)din&ad&heIESionSamenvattingHet in dit proefschrift beschreven werk betreft voornamelijk de expressie en functie van hydrofobinegenen in de homobasidiomyceten Schizophyllum commune en Agaricus bisporus (gewonechampignon).Hoofdstuk II and Hoofdstuk III behandelen de isolatie en karakterisering van tweehydrofobines uit A. bisporus en van de voor deze eiwitten coderende genen welke tot expressiekomen in verschillende levensstadia van de organisme. ABH| komt tot expressie in devntchtlichÍImen en ABH3 in het vegetatieve mycelium van A. bisporus. Beide hydrofobines blekeneigenschappen te hebben vergelijkbaar met die van de SC3 hydrofobine van S. commune. ABHIgeeft hydrofobiciteit aan de meest externe weefsels van de hoed van de vmchtlichamen maar is ookin mindere mate aarwezig in het interne weefsel van de hoed. ABH3 wordt uitgescheiden in hetcultuunnedium en bedekÍ luchthyfen welke hierdoor hydrofoob zijn. Mogelijkerwijs is ABH3 ookbeffokken bij het doorbreken van de wateroppervlak door middel van een verlaging van deoppervlaktespanning, zoals bleek uit gedeeltelijke complementatie van een ^SCi mutant van S.commune door ABH3.In Hoofdstuk IV wordt de isolatie en karakterisering van het hydrofobine SC4 van ,S.commune beschreven. Antilichamen tegen SC4 en ABHI werden gebruikt om deze twee eiwitten inhet plectenchym van vmchtlichamen van respectievelijk, S. commune en A. bisporus te lokaliseren.Op grond van de in vitro bepaalde eigenschappen van deze hydrofobines, wordt Íumgenomen dathyfen in het plenctenchym hydrofobine monomeren uitscheiden welke diffunderen in deextracellulaire matrix en dat, wanneer deze monomeren in contact komen met lucht, assemblageopfreedt. Hierdoor worden de luchtkanalen aanwezig in deze weefsels voorzien van een hydrofobebedekking, in overeenstemming met de gevonden lokalisatie vandeze hydrofobines. Hierdoor wordtwaarschijnlijk bereikt dat deze kanalen open blijven en niet gevuld worden met water onder natteomstandigheden waadoor de gas uitwisseling in deze weefsels beperkt zou worden.Om te onderzoeken of hydrofobines met vergelijkbare frsisch-chemische eigenschappenelkaar kunnen vervangen werd er gepoogd om de fenotype van een SC-3 mutant van S. commune tecomplementeren met het ABHI gen van A. bisporus (Hoofdstuk \r). Hoewel de expressie van ABHIin deze stam hoog was en leidde tot het verschijning van rodlets op de oppervlakÍe van luchthyfen,werd geen herstel waargenomen van het hydrofobe karakter van deze hyf.n. Waarschijnlijk komt ditdoor de gevoeligheid van ABHI voor proteolyse.Hoofdstuk VI rapporteert de base volgorde van het ,SCó gen dat voor een vierdehydrofobine van S. commune bleek te coderen. Het SC6 eiwit heeft een opvallend lang hydrofielsegment voor het eerste cysteine residu van de voorspelde "matuÍe" eiwit, veel langer dan in anderebekende hydrofobines. Om de eigenschappen van SC6 te bestuderen, werd geprobeerd over-expressievan SC6 in een monokaryon te verkrijgen. Hoewel een hoge ,SCó mRNA accumulatie werdwaargenomen wanneer de SCd coderende gebied onder confole van de regulatorische sequenties vanSCi werd gebracht, kon geen SC6 eiwit worden gedetecteerd.Hoofdstuk VII beschrijft de isolatie van het SC15 gen dat codeert voor een eiwit databundant wordt uitgescheiden in het cultuurmedium en dat ook aanwezig is in de polysaccharidematrix die de luchthyfen omgeeft. Evenals,SC3 schijnt,SCIJ gereguleerd te worden door de MATBgenen. De betrokkenheid van SCl5 in de vonning van luchthyfen wordt gesuggereerd door het feitdat mutaties welke de fonnatie van luchthyfen negatief beurvloeden (thn and matBcon) ook deexpressie van .SC1J remmen.Hoofdstuk VIII behandelt een fenomeen waargenomen tijdens de complementatie)onfornceLblefornÍÍrssusrentand)nesIeneI fortiae.mts.gousrd tolike87SaNagNvarrnlcexperimenten beschreven in Hoofdstuk V. ABHl,,SCi en SCó bleken alleen tot expressie te komen(mRNA vorming) wailleer intronen aanwezig wzren in de getranscribeerde deel van het gen. Deinronen bleken nodig te zijn voor de u.r*.rking van het primaire transcript tot mRNA. Introductievan één kunstmatigè itttron was genoeg om mRNA accumulatie te induceren uitgaande van eeninfionloos gen. Deze resultaten openen nieuwe perspectieven voor de expressie van heterologe genenin homobasidiomYceten.AIic, Madenine494.Arundlrtype I 1conditicÁsgeirsUniversÁsgeirschromorÁsgeirscontrolI28t-tiÁsgeirsgenes olBiol22Austin,NeurostrBarrettMicrobiBell-Peris allelic6,2382-BinningbasidiorBowdenthe ceralBowden(1ee6).MicrobeBuchmaMol Cel,Callis, JDev l, ICarle.Usplicing.CarreznR. (lee0nidulansCasseltoMicrobitChee, P.in foreigChung, IMol CellCraig, Gstipe elorDe GrocAgaricuscaps duriDe Vriecomplext88

https://pure.rug.nl/ws/files/3202262/basidomycetes.PDF

Function and expression of hydrophobins in the basidiomycetes Schizophyllum commune and Agaricus bisporus

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

ARTS repository - University of Groningen

Dissertations of the University of Groningen

Proceedings - University of Groningen

ARTS repository - University of Groningen

University of Groningen Research Database

University of Groningen

Dissertations of the University of Groningen