海野 まりえ

海野, まりえ

C-RECS （Creative Repository of Electro-Communications)

                                 修 士 論 文 の 和 文 要 旨   大学院  電気通信学研究科  博士前期課程     量子・物質工学 専攻  氏     名  海野 まりえ  学籍番号 0333004  論 文 題 目  高度好熱菌のプリンヌクレオチド生合成系遺伝子群の 発現制御に関する研究 ＜序論＞ 真生細菌の物質代謝系のオペロン（遺伝子発現の単位）の構造は、集約型や分散型が存在するなど、生物種によって多様である。三瓶研究室では、オペロンの構造に加えて、発現制御機構を様々な生物種間で比較することにより、オペロンの編成、そして物質代謝系の編成について考察することを試みている。本研究はその一環として高度好熱菌Thermus thermophilusを研究対象とし、プリンヌクレオチド生合成系（以下プリン生合成系）の6番目の反応に関与する酵素をコードするpurEKオペロンの発現制御についての解析を行った。  ＜実験方法＞ 1 purEKオペロンの制御領域の推定 ・purEKオペロンを含むDNA領域をPCR法により増幅し、ベクターpTWV228に クローニングした（pTWV228-purEK）。 ・pTWV228-purEKを保持する大腸菌よりmRNAを回収し、プライマー伸長法により転写開始点を推定し、プロモーター領域を特定した。これにより、purEKオペロンの5´制御領域の範囲を推定した。  2 発現レポーターを用いたpurEK発現量の測定 ・purEKオペロンの5´、3´領域をベクターpBHTK1-bglにクローニングし、発現レポーターを作製した（pBHTK1-bgl-purEK）。 ・発現レポーターpBHTK1-bgl-purEKをThermus thermophilus BP111株またはBP112株（ともにΔbgl株）に形質転換し、発現レポーターが染色体に組み込まれた組換え体を選別した。 ・アデニン（またはグアノシン、もしくはヒポキサンチン）添加、非添加時でのβ-ガラクトシダーゼ活性の比較を行なった。  ＜結果＞ 1 purEKオペロンの制御領域の推定 ・purEKオペロンのpTWV228へのクローニングが成功した。 ・プライマー伸長法により転写開始点が推定された。  2 発現レポーターを用いたpurEK 発現量の測定 ・発現レポーターが完成した。これをThermus thermophilus  BP111株またはBP112株（ともにΔbgl株）に形質転換した。この形質転換体をPCRで増幅後、電気泳動にかけ、構造を確認した。 ・β-ガラクトシダーゼ活性を測定し比較したところ、アデニン（またはグアノシン、もしくはヒポキサンチン）添加時、非添加時共に活性は、ほぼ同じであった。  

高度好熱菌プリンヌクレオチド生合成系遺伝子群の発現制御に関する研究

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高度好熱菌プリンヌクレオチド生合成系遺伝子群の発現制御に関する研究

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