Generación de las herramientas moleculares para el estudio de la participación del sistema de dos componentes ArcAB en la evasión del sistema inmune adaptativo de Salmonella Typhimurium

Abstract

Tesis (Ingeniería en Biotecnología)El estudio de Salmonella Typhimurium a llevado a conocer una variedad de mecanismos moleculares con los que lograr sobrevivir a la acción de las células del sistema inmune, tales como, macrófagos neutrófilos y células dendríticas. También se han caracterizado mecanismos de resistencia y de evasión a la acción de presentación de antígenos por parte de las células dendríticas provocando la disminución de la activación de linfocitos, por ende, evadiendo a la respuesta inmunitaria del hospedero. A su vez, el sistema de dos componentes ArcAB ha sido vinculado con la regulación de los mecanismos de resistencia y de la regulación de la virulencia bacteriana, por lo que su participación en la capacidad de evasión de Salmonella al sistema inmune adaptativo del hospedero tiene mucha relevancia. Por lo que se diseñaron cepas de Salmonella Typhimurium 14028s para su estudio posterior, a través de una herramienta molecular utilizada para el estudio inmunológico de Salmonella y su interacción con células dendríticas y linfocitos T, que consiste en la expresión heteróloga de la proteína ovoalbúmina por parte de la bacteria y la utilización de linfocitos T antígeno-OVA específicos. Esta herramienta permitirá realizar un seguimiento de la activación, proliferación y diferenciación de los linfocitos T CD4+ y CD8+ durante la infección de Salmonella. La generación de las cepas mutantes fue demostrada por la capacidad de crecimiento en sus medio selección y la corroboración de la ausencia del gen mediante PCR, mientras que la expresión heteróloga de la proteína ovoalbúmina fue comprobada mediante inmunodetección, obteniendo en este trabajo cepas silvestre, mutantes en los genes arcA, arcB, arcAB y cepas mutantes para controles en los genes invA (capacidad de invasión) y slyA (regulación de virulencia) con la capacidad de expresar la proteína ovoalbúmina, obteniendo características que destacan por sobre otros diseños ya utilizados para el estudio inmunológico de interacción de Salmonella y células dendríticas con potencial biotecnológico