Tesis (Tecnólogo Médico, mención bioanálisis clínico, inmunohematología y banco de sangre)Las Células Madres Mesenquimales (MSC) son células multipotentes con capacidad de auto-renovación que presentan una fuerte actividad inmunosupresora. La presencia de elevados niveles de IFN-γ, por sí sólo, o en combinación con otras citoquinas pro-inflamatorias, como TNF-α o IL-1β aumentan las capacidades inmunosupresoras de MSC en un proceso denominado licenciamiento.
Por otra parte, el neurotransmisor inhibitorio ácido-γ-aminobutírico (GABA) es un importante molécula inmunosupresora producida mediante la descarboxilación del ácido L-glutámico por la enzima ácido glutámico descarboxilasa, GAD. En mamíferos, existen dos isoformas, GAD-67 and GAD-65, las que difieren en peso molecular, localización subcelular y requerimientos de cofactores. Se ha demostrado que el neurotransmisor GABA es una potente molécula anti-inflamatoria que inhibe: primero, la proliferación de células T In vitro; segundo, la secreción de citoquinas pro-inflamatorias por macrófagos activados, y tercero, la función de células presentadoras de antígeno.
En nuestro laboratorio hemos demostrado que el licenciamiento de MSC con IFN-γ e IL-1β aumenta selectivamente los niveles de mRNA y
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proteína de GAD-67, y estos aumentos correlacionan con una mayor capacidad inmunosupresora de las células MSC, sugiriendo que GABA podría constituir un mecanismo efector de la inmunosupresión mediada por MSC. Sin embargo, no se ha demostrado que las células MSC licenciadas puedan secretar más GABA. En el presente trabajo se implementó un ensayo basado en fluorescencia para la detección de GABA con alta sensibilidad (LOQ=2 μM), y se analizaron los medios condicionados de células MSC tratadas con IFN-γ/IL-1β y de ensayos de co-cultivo de células MSC y linfocitos T CD4+ a diferentes razones de MSC: TCD4+. Pese a detectar niveles secretados de GABA en células HEK293 transfectadas con GAD-67/GAD-65 como control positivo, no se logró detectar con sensibilidad suficiente los niveles de GABA secretados por MSC en el co-cultivo. Se discutirán consideraciones técnicas sobre el ensayo y posibles mejoras a la determinación de GABA en medios condicionados de MSC
