Molecular characterization of the strains cause sheep-Hydatid cyst, in Chaharmahal va Bakhtiary province using restriction fragment length polymorphism

Abstract

چکیده: زمینه و هدف: کیست هیداتیک مرحله لاروی کرم اکینوکوکوس گرانولوزوس از رده سستودهاست که در بدن انسان و تعدادی از پستانداران ایجاد بیماری اکینوکوکوزیس می نماید. استرین های متفاوتی تاکنون از این انگل در دنیا گزارش شده که این تنوع استرینها ممکن است بر اپیدمیولوژی و بیماریزائی کیست هیداتیک اثر بگذارد. هدف از این مطالعه بررسی استرین های ایزوله‌های گوسفندی در استان چهارمحال و بختیاری با استفاده از روش PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction- Restriction Fragment Lengh Polymorphism) بود. روش بررسی: بدین منظور تعداد 30 نمونه کیست هیداتیک با منشاء گوسفندی در سال 1383 از کشتارگاههای سراسر استان جمع آوری گردید. پس از استخراج DNA ژنومی پروتواسکولکسهای کیست هیداتیک با استفاده از روش فنل کلروفرم، ناحیه rDNA-ITS1 (ribosomal DNA-Internal Transcriibed Spacer1) هر کدام از ایزوله ها با استفاده از پرایمرهای (Forward) BDI،s 4 (Reverse) تکثیر گردید. سپس محصولات بدست آمده توسط چهار آنزیم Taq1, HpaII, Rsa1, Alu1 هضم گردید و محصولات PCR و هضم آنزیمی با استفاده از ژل پلی اکریل آمید الکتروفورز و توسط روش نیترات نقره رنگ آمیزی شد. یافته ها: طبق نتایج بدست آمده اندازه قطعه rDNA-ITS1 تکثیر یافته، bp1000 بود. پس از هضم آنزیمی با آنزیمALu1 ، قطعاتی با اندازه bp800 و bp200 با آنزیم RSal قطعاتی با اندازه bp655 و bp 345 و آنزیم HpaII قطعات با اندازه bp700 و bp 300 بدست آمد. با استفاده از آنزیم Taq1 تغییری در اندازه حاصل نشد و قطعه با اندازه bp 1000 در الکتروفورز مشاهده شد. نتیجه گیری: نتایج بدست آمده نشان دادند که سویه گوسفندی کیست هیداتیک غالب در استان چهارمحال و بختیاری ژنوتیپ G1 است که مطابق با سویه شایع ایران و جهان می باشد