Bone extracellular matrix (ECM) gives bone its unique mechanical properties, thus being
important in bone tissue engineering to mimic its native composition and microstructure. The
main component in bone ECM is Type-I collagen, which works as a scaffold for bone cell
attachment and mineral deposition. There are two locations where mineralization takes place: the
intrafibrillar and interfibrillar spaces of collagen fibrils. Several theories try to explain mineral
formation in bone tissue. However, none of them was proven right, and so, the mechanism for
mineralization facilitated by the collagen lattice is still unknown. This way, it is essential to study
such a mechanism and develop bone tissue engineering approaches to mimic bone ECM.
In this work, we hypothesized that collagen fibrils alignment would promote scaffolds
mineralization. To prove it, we 3D printed fibrillar collagen hydrogels scaffolds using the
suspension 3D printing technique, in which a gelatin slurry was used as a suspension bath. First,
an optimization of the printing process was performed. Then scaffolds were printed, choosing the
finest (123 ± 25 µm) and largest fiber diameter (215 ± 66 µm) obtained. Fiber diameter size was
proven to affect the collagen fiber alignment inside the scaffolds and, consequently, affect mineral
precipitation. The smallest fiber diameter scaffold showed signs of mineralization after one day
inside a mineralization solution. In contrast, the largest fiber scaffold only presented
mineralization signs after three days of submersion. Moreover, suspended electrowriting was
introduced in this dissertation, obtaining a 40 µm jet diameter inside a castor oil bath, proving to
be a promising additive manufacturing technology to achieve higher resolution constructs when
3D printing hydrogels.A matrix extra celular (ECM) do osso confere-lhe as suas únicas propriedades mecânicas
e, portanto, torna-se importante mimetizar a composição e microestrutura nativa da ECM em
engenharia de tecidos ósseos. O colagénio tipo-I é o principal componente da ECM e funciona
como suporte para adesão celular e deposição de minerais, podendo a mineralização ocorrer nos
espaços Intra e interfibrilares do colagénio. Existem algumas teorias que tentam explicar os
mecanismos de formação de minerais no tecido ósseo. Contudo, nenhuma foi comprovada,
fazendo com que, o mecanismo pelo qual a mineralização facilitada por colagénio ocorre, seja
ainda desconhecido. Desta forma, estudar este mecanismo e desenvolver técnicas, em engenharia
de tecidos, para que seja possível mimetizar a ECM do osso, torna-se essencial.
Neste projeto, teorizámos que o alinhamento das fibrilas de colagénio em scaffolds iriam
promover a sua mineralização. Deste modo, hidrogéis de colagénio fibrilar foram impressos
recorrendo à técnica de impressão em suspensão, na qual foi utilizado um banho de suspensão à
base de gelatina. Inicialmente, a otimização do processo de impressão foi efetuada. De seguida,
as fibras mais estreitas (123 ± 25 µm) e largas (215 ± 66 µm) foram escolhidas para realizar a
impressão das estruturas desejadas. Foi provado que o diâmetro das fibras influencia o
alinhamento das fibrilas de colagénio nas estruturas e, consequentemente, a sua mineralização.
As fibras de menor dimensão apresentaram sinais de mineralização após um dia de submersão na
solução de mineralização, enquanto que, as fibras mais largas exibiram sinais de deposição de
minerais apenas após três dias. Adicionalmente, a técnica de suspended electrowriting foi
introduzida nesta dissertação, obtendo-se um diâmetro de jato de 40 µm dentro de um banho de
óleo de ricínio, provando que esta é uma técnica promissora de fabrico aditivo, que nos permite
atingir melhores resoluções na impressão 3D de hidrogéis
